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小丫的維尼熊木蟲 (小有名氣)
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[交流]
普通PCR基因組出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶解決對(duì)策 已有1人參與
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PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶與非特異性擴(kuò)增帶。 1 原因 一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。 二是Mg2+離子濃度過(guò)高、 退火溫度過(guò)低， 及PCR循環(huán)次數(shù)過(guò)多有關(guān)。 其次是酶的質(zhì)和量，往往一些來(lái)源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來(lái)源的酶則不出現(xiàn)， 酶量過(guò)多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。 2 對(duì)策 ①必要時(shí)重新設(shè)計(jì)引物。 ②減低酶量或調(diào)換另一來(lái)源的酶。 ③降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。 ④適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法(93℃變性，65℃左右退火與延伸)。 生物一一四 |
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addictedfish
鐵蟲 (初入文壇)
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zhang8826857(金幣+5): 雖然這回帖沒(méi)啥質(zhì)量，但是新蟲這么少金幣，呵呵，鼓勵(lì)一下 2011-10-24 09:06:43
zhang8826857(金幣+5): 雖然這回帖沒(méi)啥質(zhì)量，但是新蟲這么少金幣，呵呵，鼓勵(lì)一下 2011-10-24 09:06:43
| 收獲收獲啊 |
2樓2011-10-23 23:35:53
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