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小丫的維尼熊木蟲 (小有名氣)
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導(dǎo)致或抑制星號(hào)活性的因素
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1 導(dǎo)致星號(hào)活性的因素: 1) 較高的甘油濃度(>5% v/v); 2) 酶與底物DNA比例過(guò)高(不同的酶情況不同,通常為>100 U/µg); 3) 低鹽濃度(<25 mM); 4) 高pH值(>pH 8.0); 5) 存在有機(jī)溶劑(如DMSO、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、sulphalane等); 6) 用其他二價(jià)離子替代鎂離子(如Mn2+,Cu2+,Co2+,Zn2+等); 以上因素的影響程度因酶的不同而有所不同。例如EcoR I比 Pst I對(duì)甘油濃度更敏感,而后者則對(duì)高pH值更敏感一些。 2 抑制星號(hào)活性的方法: 1) 盡量用較少的酶進(jìn)行完全消化反應(yīng)。這樣可以避免過(guò)度消化以及過(guò)高的甘油濃度。 2) 盡量避免有機(jī)溶劑(如制備DNA時(shí)引入的乙醇)的污染。 3) 將離子濃度提高到100-150 mM(若酶活性不受離子強(qiáng)度影響)。 4) 將反應(yīng)緩沖液的pH值降到7.0。 5) 二價(jià)離子用Mg 2+。 [ Last edited by 西瓜 on 2011-10-4 at 00:40 ] |

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