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小丫的維尼熊木蟲 (小有名氣)
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[交流]
導致或抑制星號活性的因素
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1 導致星號活性的因素： 1) 較高的甘油濃度（>5% v/v）； 2) 酶與底物DNA比例過高（不同的酶情況不同，通常為>100 U/µg）； 3) 低鹽濃度（<25 mM）； 4) 高pH值（>pH 8.0）； 5) 存在有機溶劑（如DMSO、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、sulphalane等）； 6) 用其他二價離子替代鎂離子（如Mn2+，Cu2+，Co2+，Zn2+等）； 以上因素的影響程度因酶的不同而有所不同。例如EcoR I比 Pst I對甘油濃度更敏感，而后者則對高pH值更敏感一些。 2 抑制星號活性的方法： 1) 盡量用較少的酶進行完全消化反應。這樣可以避免過度消化以及過高的甘油濃度。 2) 盡量避免有機溶劑（如制備DNA時引入的乙醇）的污染。 3) 將離子濃度提高到100-150 mM（若酶活性不受離子強度影響）。 4) 將反應緩沖液的pH值降到7.0。 5) 二價離子用Mg 2+。 [ Last edited by 西瓜 on 2011-10-4 at 00:40 ] |
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