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T載體連接目的片段后做藍(lán)白斑全都是假陽性
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我最近在做T載體，實驗中發(fā)現(xiàn)連接目的片段轉(zhuǎn)化DH5a后，在藍(lán)白斑的板上出現(xiàn)的都是白斑，鑒定后全部是假陽性 實驗已確定的是： 1 T載體構(gòu)建的過程沒有問題，因為剛構(gòu)建好的時候連接目的片段試用后效率還是挺高的； 2 X-gal 應(yīng)該沒有問題，最近也有其他人用同一批IPTG X-gal，平板上也有藍(lán)斑； 3 連接的目的片段是PCR產(chǎn)物，所用Taq酶不是高保真的，就是說末端是加了A的； 4 T載體和PCR產(chǎn)物都是切膠回收的 本人自己分析的原因有可能是T載體的T末端堿基丟失了，但是該末端是酶切后產(chǎn)生的，感覺不應(yīng)該那么容易掉 還請高人幫忙分析一下原因，還有如果是我分析的原因該怎么避免 |
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