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lijunqing525金蟲 (正式寫手)
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[求助]
包涵體蛋白純化
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| 大腸桿菌中包涵體已經(jīng)在含8M尿素的tris-hcl中裂解了，后面怎樣除去高濃度的尿素，用什么溶液？咋樣純化得出我所需的目的蛋白？望高手指教。 |
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【答案】應助回帖
lijunqing525(金幣+30, 博學EPI+1): 10 2011-10-17 18:52:32
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可以先進行蛋白濃縮處理，如果你覺得必要，但我個人在上柱之前從不濃縮，干嗎要多一個步驟呢，層析本來就會有濃縮的作用。 2. 蛋白濃縮方法在實驗室做還是PEG比較簡單，只需要一個透析袋就夠了。但我個人喜歡超慮，不好意思。不建議用(NH4)2SO4沉淀或丙酮沉淀。 3. 不管用哪種方法濃縮，如果濃度一上去蛋白就大量沉淀，那對不起請重新優(yōu)化你的復性方案。但也請避免過量濃縮蛋白，如果一個蛋白在2mg/ml以下是穩(wěn)定的，那就千萬不要濃縮到3mg/ml。 4. 8M尿素一般情況下是不會影響你的掛柱的。 5. 用PEG干粉包埋透析袋的方法進行蛋白濃縮的時候，所有的小分子（只要分子量小于透析袋截留分子量的）都可以自由進出。一般實驗室我見過的用10KD左右的透析袋比較多，我想你應該也是用這種的，所以請不要用PEG6000的干粉了，你不是在做濃縮，你是在做PEG沉淀，因為你的PEG都跑透析袋里去了。 |
2樓2011-10-17 15:35:13
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