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[求助]
多個(gè)亞基蛋白 ORF串聯(lián)表達(dá)
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請問：4個(gè)亞基的蛋白 ，4個(gè)ORF可否串聯(lián)在一起 構(gòu)建一個(gè)重組子表達(dá) 如果可以，那么 （1）ORF之間是否需要添加其他序列 （2）4個(gè)ORF共用一個(gè)啟動子會不會影響表達(dá)效率 （3）每個(gè)ORF都要保留有完整的其實(shí)種子密碼子么 （4）構(gòu)建重組子時(shí)應(yīng)注意哪些問題 不勝感激！ |
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2樓2011-11-01 10:36:51
西瓜
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3樓2011-11-01 17:16:17
4樓2011-11-01 17:59:28
西瓜
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5樓2011-11-01 18:06:15
6樓2011-11-01 20:47:03
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
wanhscn(金幣+4, MolEPI+1): 很好,很熱心!授予專家指數(shù)一枚! 2011-11-12 10:01:16
wanhscn(金幣+4, MolEPI+1): 很好,很熱心!授予專家指數(shù)一枚! 2011-11-12 10:01:16
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把stop codon 去掉是可以的，這是融合表達(dá)，GFP是用來做報(bào)告基因的，但是我感覺樓主需要的是翻譯的蛋白還能組裝，所以建議如果做融合表達(dá)的話在兩蛋白之間加一柔性linker 當(dāng)然也可以做單promoter的表達(dá)，一個(gè)promoter，基因不去除stop codon，在第二個(gè)基因之前加RBS序列 呵呵，最簡單的是一個(gè)promoter加一個(gè)基因。后面再一個(gè)promoter加一個(gè)基因，才四個(gè)嘛，怕什么，人家基因組都組裝起來了 |
7樓2011-11-11 23:25:01
charles08
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8樓2013-07-11 00:13:42
charles08
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9樓2013-07-11 00:13:57
曼陀羅的祈禱
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第一個(gè)問題：我也要做兩個(gè)基因的串聯(lián)，你說的只留最后一個(gè)orf的終止密碼子，你是用的“啟動子+基因1+基因2+終止子”這種模式，還是第二種“啟動子1+基因1+終止子1+啟動子2+基因2+終止子2”這種嗎？ 第二個(gè)問題：原核表達(dá)一般不都是只需要成熟肽序列轉(zhuǎn)入表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)嗎，我要做的蛋白ai包含兩個(gè)亞基，a和b,我能不能直接把兩個(gè)亞基的成熟肽序列轉(zhuǎn)入表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)，兩個(gè)亞基的串聯(lián)順序如何，哪種串聯(lián)方式，要不要加多余的序列，設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)引物的時(shí)候要不要考慮這個(gè)問題，我用的表達(dá)載體是pet32a 跪謝大神  |
10樓2015-08-19 16:33:21
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