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zhangqian082新蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR沒有條帶，求高人指點！�。。。。。。�！
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最近在擴增兩個基因，含有酶切位點和保護堿基，片段長度和引物分別如下： 1）目的基因長度1401bp 上游引物：atg ctc gag gac acc aaa cat ttc ctg ccg ctc gat 下游引物：atg aag ctt atg ggc ccg cag gcc taa gtc att tg 2）目的基因長度1600bp 上游引物：atg ctc gag tct tgg gcc gct cgc ccg ccc tt 下游引物：atg aag ctt ggt ctg agc tca ggc cag ttg 使用的是TAKARA 的Mix 酶，使用20微升的體系如下： Premix:10微升 CDNA：2微升 Primer1:0.4微升 Primer2:0.4微升 水：7.2微升 模板是RT反轉(zhuǎn)錄的來的CDNA。 看引物的GC含量較高，就設了溫度梯度，60-70°，但是始終都沒有條帶。 現(xiàn)在要每天看老板臉色了，嗚嗚，請高人指點下，多謝！ |
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blackrose8089
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2樓2011-11-11 10:55:26
zhangqian082
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3樓2011-11-11 13:05:24
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