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catmihzh木蟲 (小有名氣)
蟲蟲特攻隊隊長
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[求助]
提基因組的問題
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用酚氯仿法提一個曲霉基因組，最后用TE溶沉淀時感覺很稠，并且有點(diǎn)淡黃，用未稀釋的和稀釋30倍的分別跑電泳，結(jié)果未稀釋的是長長的亮帶，稀釋的有一條帶，但是大小比基因組的要小，如圖，前孔是未稀釋的，后面一個是稀釋的。已經(jīng)提了三次了，都差不多這樣，求解釋。。。 |
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2樓2011-11-18 23:26:32
catmihzh
木蟲 (小有名氣)
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3樓2011-11-19 09:44:50
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4樓2011-11-19 11:37:56
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金幣+3): 有道理! 2011-11-19 18:41:40
wanhscn(金幣+3): 有道理! 2011-11-19 18:41:40
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稀釋的那處應(yīng)該比23k也沒小多少吧？ 下次點(diǎn)近一點(diǎn)Marker,建議用0.6%的膠。4-5V/cm，電泳1小時。 從你電泳圖來看，有兩個問題， 1.產(chǎn)量太高了。 2.有RNA污染。 建議： 1.不用這么多樣品量提取，或者最后溶解后再稀釋。樣品量有時并不是用得越多越好。特別如果樣品本身含有豐富的核酸酶時，如果用很多的樣品導(dǎo)致裂解液不足以抑制內(nèi)源性的核酸酶，那得不償失。適量！ 2.從你稀釋的樣品來看，23k位置有一條帶，是DNA條帶。下面的是還沒有降解完全的RNA。如不是你所用樣品量過多，那就是此霉RNA含量豐富，再要不就是你的RNase活性不足或溫育時間不夠。 |
5樓2011-11-19 14:15:39
catmihzh
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6樓2011-11-19 15:54:50
catmihzh
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，不會吧，我?guī)熃阒岸紱]用RNA酶，效果還不錯啊 7樓2011-11-19 15:56:22
dragoner
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8樓2011-11-19 17:21:46
9樓2011-11-19 21:07:22
10樓2011-11-19 21:09:24
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