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catmihzh木蟲(chóng) (小有名氣)
蟲(chóng)蟲(chóng)特攻隊(duì)隊(duì)長(zhǎng)
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[求助]
提基因組的問(wèn)題
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用酚氯仿法提一個(gè)曲霉基因組，最后用TE溶沉淀時(shí)感覺(jué)很稠，并且有點(diǎn)淡黃，用未稀釋的和稀釋30倍的分別跑電泳，結(jié)果未稀釋的是長(zhǎng)長(zhǎng)的亮帶，稀釋的有一條帶，但是大小比基因組的要小，如圖，前孔是未稀釋的，后面一個(gè)是稀釋的。已經(jīng)提了三次了，都差不多這樣，求解釋。。。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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wanhscn(金幣+3): 有道理! 2011-11-19 18:41:40
wanhscn(金幣+3): 有道理! 2011-11-19 18:41:40
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稀釋的那處應(yīng)該比23k也沒(méi)小多少吧？ 下次點(diǎn)近一點(diǎn)Marker,建議用0.6%的膠。4-5V/cm，電泳1小時(shí)。 從你電泳圖來(lái)看，有兩個(gè)問(wèn)題， 1.產(chǎn)量太高了。 2.有RNA污染。 建議： 1.不用這么多樣品量提取，或者最后溶解后再稀釋。樣品量有時(shí)并不是用得越多越好。特別如果樣品本身含有豐富的核酸酶時(shí)，如果用很多的樣品導(dǎo)致裂解液不足以抑制內(nèi)源性的核酸酶，那得不償失。適量！ 2.從你稀釋的樣品來(lái)看，23k位置有一條帶，是DNA條帶。下面的是還沒(méi)有降解完全的RNA。如不是你所用樣品量過(guò)多，那就是此霉RNA含量豐富，再要不就是你的RNase活性不足或溫育時(shí)間不夠。 |
5樓2011-11-19 14:15:39
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2樓2011-11-18 23:26:32
catmihzh
木蟲(chóng) (小有名氣)
蟲(chóng)蟲(chóng)特攻隊(duì)隊(duì)長(zhǎng)
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- 注冊(cè): 2011-04-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2011-11-19 09:44:50
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4樓2011-11-19 11:37:56
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