 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1392 | 回復(fù): 3 | |||
[交流]
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌野生菌中驗證遇到的非常非常怪的問題 已有1人參與
|
|
如題,我將4個質(zhì)粒p3,p4,p5,p6轉(zhuǎn)化到大腸桿菌野生菌中,該菌已報道有野生質(zhì)粒,并對外源質(zhì)粒有排斥性.質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后挑出能在kan平板生長的菌落,此時原菌不能在抗生素平板生長,說明(1)抗生素未失活(2)原菌不具有kan抗性.接下來就是驗證. (1)提質(zhì)粒,如圖1,p1,p2為原菌,p3-p6為重組菌.可是提出質(zhì)粒圖譜一樣的,p3,p4 是7K多,p5,p6是8K多.但是沒什么差別.將這6個質(zhì)粒進行雙酶切驗證,第一次酶切完什么都沒有了,第二次切出彌散的條帶,6個都一樣. (2)PCR驗證 如圖2,第一個M前面6個,是用重組質(zhì)粒上的抗性引物PCR,中間的4個和后面的4個分別是用重組質(zhì)粒上攜帶的目的基因引物PCR,可是原菌仍然有條帶.只是稍稍弱一些. (3)將PCR產(chǎn)物進行酶切 也許是我這三對PCR引物特異性不好,所以可能有假陽性存在,但是原菌和重組菌的PCR片段應(yīng)該不一樣,而且第一個是抗性片段,原菌是沒有抗性的,所以應(yīng)該是不一樣的,可是我用三個PCR片段中的單酶切位點進行酶切后,見圖3,也悲劇了,還是一樣一樣的,而且酶切片段與理論上是相符的.哎,這到底是個什么菌啊,豈能如此強大.現(xiàn)在唯一確定的就是重組質(zhì)粒具有抗性了.請問各位高手們,這種情況下我該怎么去驗證和解釋? 圖1 圖2 圖3 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有222人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 如何把質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備中遇到的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 提取大腸桿菌質(zhì)粒失敗的原因
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，出來的不是我要的了，怎么回事？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌感受態(tài)制備及轉(zhuǎn)化中的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
望月臺
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2739.4
- 紅花: 1
- 帖子: 193
- 在線: 157.4小時
- 蟲號: 387796
- 注冊: 2007-05-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
2樓2011-11-24 16:33:57
3樓2011-11-25 16:21:29
望月臺
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2739.4
- 紅花: 1
- 帖子: 193
- 在線: 157.4小時
- 蟲號: 387796
- 注冊: 2007-05-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
4樓2011-11-25 18:43:20
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 wql1987 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 十三加油 2026-03-21 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +3 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | Ma_xt 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +4 | llllkkkhh 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +5 | 冬十三 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 323求調(diào)劑 +3 | 洼小桶 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +16 | 于海海海海 2026-03-19 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +4 | @taotao 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +9 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|
|
|
[考研]
 320求調(diào)劑0856
+3
|
不想起名字112 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【同濟軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研求調(diào)劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專碩有科研經(jīng)歷三項國獎兩個實用型專利一項省級立項 +6 | 大火山小火山 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856專碩279求調(diào)劑 +5 | 加油加油！? 2026-03-15 | 5/250 |
|