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[求助] 關(guān)于PCR無結(jié)果的原因

最近跑的PCR一直不是很順利，采用的體系和程序都是參照師兄師姐的，自己設(shè)計(jì)了不同梯度的退火溫度，但結(jié)果還是沒有，除了拖尾還是拖尾，怎么改進(jìn)優(yōu)化，請(qǐng)各位高手好心人幫忙解決啊！謝謝！！

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1樓 2011-12-06 10:08:29

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bbwalkman

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Icityman(金幣+1): 2011-12-06 10:49:34
1949stone(金幣+1): 水一般不會(huì)吧 2011-12-06 11:37:55

1.你呢樣品沒有問題吧，不行換一下
2.看看引物怎么樣，是不是不合理還是怎么回事
3.水是不是污染了，換新的看看吧

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2樓2011-12-06 10:18:08

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Icityman

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引用回帖:

2樓: Originally posted by bbwalkman at 2011-12-06 10:18:08:
1.你呢樣品沒有問題吧，不行換一下
2.看看引物怎么樣，是不是不合理還是怎么回事
3.水是不是污染了，換新的看看吧

這個(gè)。。樣品是師姐給的，引物時(shí)我參照codehop自己設(shè)計(jì)出來的，照講有拖尾就應(yīng)該是擴(kuò)增出來了啊，水污染的可能性比較小吧

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3樓2011-12-06 10:51:03

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★
1949stone(金幣+1): 后一個(gè) 估計(jì)一般同學(xué)不會(huì)犯 2011-12-06 11:38:33
Icityman(金幣+9): 1 2011-12-07 10:01:02

模板濃度你知道不？如果模板濃度過高，pcr也不會(huì)出來產(chǎn)物，還有就是引物前后向濃度是否一致也會(huì)對(duì)結(jié)果有影響，建議用大公司合成隱物

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4樓2011-12-06 10:57:59

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wanhscn(金幣+5): 鼓勵(lì)新蟲友發(fā)帖！ 2011-12-06 14:52:51

個(gè)人覺得拿來的樣品，引物，程序等自己先進(jìn)行下確認(rèn)，這些是否是你要的，模板是否符合PCR，設(shè)個(gè)質(zhì)粒的陽性對(duì)照，引物會(huì)不會(huì)是按CDNA設(shè)計(jì)的而你用基因組當(dāng)模板？我們實(shí)驗(yàn)室就出現(xiàn)過這種低級(jí)錯(cuò)誤，

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5樓2011-12-06 13:25:51

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陳小菡

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★
西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-12-06 22:57:05

拖尾現(xiàn)象是由于支持介質(zhì)的表面對(duì)被分離的樣品有一定的吸附作用，使分離樣品滯留而降低了電泳速度。我個(gè)人覺得更新一下電泳緩沖液，不知道對(duì)不對(duì)。

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6樓2011-12-06 16:05:41

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julietguo

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西瓜(金幣+2): 歡迎常來哦 2011-12-06 22:57:21

模板、引物和dNTP反復(fù)凍融會(huì)影響PCR擴(kuò)增效果的，你要不要換個(gè)新的模板試試？

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7樓2011-12-06 16:06:50

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robert1988

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西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2011-12-06 22:57:30

延長一下延伸的時(shí)間試試，我也不知道為什么，不過上次這么處理了之后好很多，可以嘗試一下。

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8樓2011-12-06 22:25:01

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首先，先看看你的模板DNA是否降解了。然后，再檢查下你所用的PCR反應(yīng)的東西是否變質(zhì)了。如果上面兩個(gè)都沒有問題，那么你可以試著降低退火的溫度，但是也不能降得太低了。

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9樓2011-12-06 22:59:23

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看看引物是不是合適

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吃地苦中苦，方為人上人

10樓2011-12-07 09:32:20

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