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angelee新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法 已有2人參與
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求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法。之前，設(shè)計(jì)引物以cDNA為模板擴(kuò)增，結(jié)果沒(méi)有任何條帶，究竟是為什么呢？求解答~ |
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小蛐蛐第一名
新蟲(chóng) (初入文壇)
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9樓2012-12-20 21:08:02
shaquila
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2樓2011-12-10 07:49:21
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【答案】應(yīng)助回帖
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lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-12-10 10:56:18
lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-12-10 10:56:18
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先看看引物設(shè)計(jì)問(wèn)題，Tm是不是太低了，有沒(méi)有引物二聚體。 如果引物設(shè)計(jì)沒(méi)有問(wèn)題的話，看看cDNA序列中有沒(méi)有高GC含量的片段等difficult 序列。有得話，試試two-step PCR，或者加點(diǎn)DMSO或甜菜堿。去網(wǎng)上google一下吧，會(huì)有有用的信息的。 4Kb不算太大，應(yīng)該是沒(méi)問(wèn)題的。 |
3樓2011-12-10 10:03:06
cxl_yll
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4樓2011-12-10 10:34:26
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