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junxiao0320金蟲 (小有名氣)
學(xué)生
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[求助]
表達(dá)載體雙酶切
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| 本人從T載體上切下目的片段，連到表達(dá)載體pQE30上用的是ECORI和SPHI但是酶切就是很難切下來 |
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blackrose8089
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2樓2011-12-20 11:58:18
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你用的是哪個(gè)公司的酶，雙酶切時(shí)要注意下列多種因素： Buffer是否兼容；酶量是否足夠（不同公司在定義酶的活性單位時(shí)用的底物并不完全相同，因而即使相同名字的酶，如來自不同的公司，使用量也不盡相同，根據(jù)酶單位定義的底物可以進(jìn)行大致的估算）；控制酶切體系的甘油濃度（小于10%）；當(dāng)然質(zhì)粒的質(zhì)量也很重要。 |
4樓2011-12-20 21:33:30
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 雙酶切找個(gè)兼容的Buffer很重要，如果找不到能提供兩個(gè)酶50%活力的buffer，一個(gè)辦法是增加酶量和酶切時(shí)間，但可能出現(xiàn)星號活力，還有一個(gè)辦法就是分兩次單酶切，各選擇最高活性的buffer，這個(gè)辦法可行，就是麻煩點(diǎn)。 |
5樓2011-12-20 22:41:59
catq
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blackrose8089
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