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flytime1115銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
有木有人做過Taqman 探針法Real-Time?? 已有1人參與
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| 我要檢測基因組中插入的某個外源片段的拷貝數(shù),需要做絕對定量。師兄建議不要用sybr 燃料做,建議用探針法做,F(xiàn)在毫無頭緒,不知道怎么設計,怎么合成?望各位高人指點一下…… |
金蟲 (正式寫手)
銅蟲 (初入文壇)
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金蟲 (正式寫手)
鐵桿木蟲 (著名寫手)

鐵桿木蟲 (著名寫手)

鐵桿木蟲 (著名寫手)
| 我做過檢測重組畢赤酵母中外源基因拷貝數(shù)的實驗,用的就是探針法,內(nèi)參用的是GAPDH,檢測的準確度和重復性還是很好的!引物和探針你自己不要設計,交給專業(yè)的設計公司設計和合成,也不是很貴,國內(nèi)的公司一套探針引物(包括上下游引物,探針)也就1200+吧,國外的ABI等公司合成一般要貴一倍左右,一般可以做1500-2000個樣品。SYBY法不是很準確,精確定量最好還是用探針法,我的實驗用的樣品的基因組DNA和你的不大一樣,不過原理差不多的。 |

金蟲 (正式寫手)
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還好吧,轉(zhuǎn)基因能插入多少多少拷貝呢,至少在植物轉(zhuǎn)化中,幾乎所有文獻都是用southern雜交檢測,有嘗試過用熒光定量,但是效果顯然不如此法準確,至少存在爭議 下面是探討用熒光定量驗證植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的文獻 Two-fold differences are the detection limit for determining transgene copy numbers in plants by real-time PCR Estimating the number of integrations in transformed plants by quantitative real-time PCR |
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