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郝連芷水木蟲 (小有名氣)
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[求助]
酶切酶連轉(zhuǎn)化
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各位，請教個問題。 我需要重組構(gòu)建個質(zhì)粒，要將A質(zhì)粒的7kb片段PCR出來（KOD酶），B質(zhì)粒的1.7kb片段PCR出來（Pfu酶），然后再進(jìn)行雙酶切，酶連，轉(zhuǎn)化（沒有好的酶切位點(diǎn)，只有P出來）。 現(xiàn)在遇到的問題是P出來的非特異帶很多，目的帶回收后濃度非常低15ng/µl（100µl體系），而且目的條帶有時有有時沒有。然后我還要酶切，再回收，幾乎就沒有了，然后轉(zhuǎn)感受態(tài)，做了n批，都沒有陽性克隆，不知道問題出在哪里。求教如何改善？ |
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tianhuijuan
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4樓2011-12-26 11:15:13
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