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提RNA反轉錄后，用GAPDH和TLR進行PCR，可是GAPDH條帶很亮，TLR怎么都出不來
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各位大俠，我最近提了RAW264.7細胞的RNA，反轉錄后，用GAPDH和TLR進行PCR，可是GAPDH條帶很亮，TLR怎么都出不來。 第一次加了6微升DEPC水溶解RNA，然后取5微升RNA溶液作RT-PCR（20微升體系），再分別用GAPDH和TLR2進行PCR。 圖見1 第二次取500ng 小鼠肺組織、RAW264.7細胞的總RNA，進行逆轉，用的是M-MLV的酶，按照protocol上的10微升體系，在用TLR1和GAPDH進行PCR。結果還是只有很亮的GAPDH，不過兩次PCR都有很多引物二聚體。 見圖2 誰能告訴我這到底是為什么呀~~~ 1 MARKER 1RAW(GAPDH tlr2) 2RAW(GAPDH tlr2) 2 MARKER TLR1(肺 1RAW 2RAW) GAPDH(肺 1RAW 2RAW).jpg |
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frank213
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