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隔夜涼白開新蟲 (小有名氣)
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[求助]
除了利用同源性做PCR外,如何定向篩選一個(gè)基因?
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| 我目前在做一個(gè)菌株中纖維素酶的擴(kuò)增分析,原定方案是簡單的利用其他已知纖維素酶的同源性設(shè)計(jì)引物把我要的目的基因P出來,但是可能因?yàn)槲覍?shí)驗(yàn)的菌株同源性差,一直是陰性實(shí)驗(yàn)結(jié)果,F(xiàn)在想向各位高手請(qǐng)教下,還有什么別的較為簡便的方法能篩選擴(kuò)增出一個(gè)基因?時(shí)間比較緊迫。我還設(shè)想過用基因陷阱,但是這能定向篩出目的基因嗎? |
木蟲 (著名寫手)
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實(shí)際上,就是單純的利用同源性的方法,也不一定行不通的。 首先,使用幾種進(jìn)化上比較接近的幾個(gè)種屬目的蛋白進(jìn)行blast,找到比較保守的氨基酸序列,然后合成簡并引物。電泳后,切下條帶測(cè)序。如果能夠得到一些目的基因的核苷酸序列信息的話,那么可以繼續(xù)做RACE。 祝實(shí)驗(yàn)順利。 |

木蟲 (正式寫手)
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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