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隔夜涼白開(kāi)新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
除了利用同源性做PCR外，如何定向篩選一個(gè)基因？
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| 我目前在做一個(gè)菌株中纖維素酶的擴(kuò)增分析，原定方案是簡(jiǎn)單的利用其他已知纖維素酶的同源性設(shè)計(jì)引物把我要的目的基因P出來(lái)，但是可能因?yàn)槲覍?shí)驗(yàn)的菌株同源性差，一直是陰性實(shí)驗(yàn)結(jié)果�，F(xiàn)在想向各位高手請(qǐng)教下，還有什么別的較為簡(jiǎn)便的方法能篩選擴(kuò)增出一個(gè)基因？時(shí)間比較緊迫。我還設(shè)想過(guò)用基因陷阱，但是這能定向篩出目的基因嗎？ |
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3樓2012-01-16 20:44:27
海闊天空8158
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【答案】應(yīng)助回帖
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xuanzhang(金幣+1): 謝謝參與交流 2012-01-16 23:00:20
隔夜涼白開(kāi)(金幣+1): ★★★很有幫助 2012-03-07 17:33:13
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隔夜涼白開(kāi)(金幣+1): ★★★很有幫助 2012-03-07 17:33:13
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實(shí)際上，就是單純的利用同源性的方法，也不一定行不通的。 首先，使用幾種進(jìn)化上比較接近的幾個(gè)種屬目的蛋白進(jìn)行blast，找到比較保守的氨基酸序列，然后合成簡(jiǎn)并引物。電泳后，切下條帶測(cè)序。如果能夠得到一些目的基因的核苷酸序列信息的話，那么可以繼續(xù)做RACE。 祝實(shí)驗(yàn)順利。 |
2樓2012-01-14 16:56:03
隔夜涼白開(kāi)
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4樓2012-03-07 17:31:22
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5樓2012-03-07 17:32:14
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