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斯多格格銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
rna條帶問題
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| 為什么提取的真菌RNA跑膠后，28s的亮度和寬度是18s的2倍呢（提取的比較好的情況下）？我在實(shí)驗(yàn)室問了好多師兄師姐，解答都不怎么理想，還請各位蟲友幫忙解答下，謝謝啦！ |
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yabxxh
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
斯多格格: 回帖置頂 2012-02-03 20:56:56
斯多格格(金幣+5): ★★★★★最佳答案 前輩肯定不在乎這幾個(gè)金幣啦，還是多謝前輩熱心幫助哈。對我?guī)椭艽�，再次感謝。 2012-02-03 21:06:31
amisking(金幣+5): 鼓勵(lì)積極應(yīng)助！ 2012-02-03 22:39:41
wanhscn(金幣+2, MolEPI+1): Good! 2012-02-04 08:48:31
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斯多格格: 回帖置頂 2012-02-03 20:56:56
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wanhscn(金幣+2, MolEPI+1): Good! 2012-02-04 08:48:31
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這個(gè)應(yīng)該是這樣的，rRNA分子量大，代謝也不活躍，原核生物中主要有5s，16s和23s rRNA，真核生物中主要有5s，5.8s，18s和28s。 一般來說，28s的分子量大約為4.7k，18s的分子量大約為1.9k，而在細(xì)胞內(nèi)28s和18s的分子數(shù)是相同的，因?yàn)樗鼈儊碓从谕粋�(gè)轉(zhuǎn)錄本，所以，摩爾數(shù)相同，質(zhì)量的比值就等于分子量的比值，這也是很多人用28s：18s是否為2:1來判斷提取的RNA質(zhì)量高低的理論依據(jù)。 當(dāng)然理論必竟是理論，實(shí)際操作中會因?yàn)樯蠘恿�、電泳條件和物種之間的差異而出現(xiàn)，28s:18s不等于2:1的情況，甚至?xí)霈F(xiàn)18s亮度大于28s的情況。這樣我們就要具體問題具體分析了。最好是用分光光度計(jì)測一下ratio值，水洗脫的話，在1.8-2.0之間的話就不錯(cuò)，如果用試劑盒里面的Elution Buffer可能會高于2.0。 希望能幫到你。 |
3樓2012-02-03 17:28:40
我是小純潔
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2樓2012-02-03 15:19:28
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4樓2012-02-03 17:29:39
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5樓2012-02-03 21:15:41
yabxxh
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小丹木木(金幣+3): 很專業(yè)的說。 2012-02-04 15:30:32
小丹木木(金幣+3): 很專業(yè)的說。 2012-02-04 15:30:32
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這個(gè)可以這么理解，正是因?yàn)镋B很靈敏，所以它很容易過載，也就是說，RNA樣品過量的時(shí)候，不是所有的RNA分子都能染色，有一種說法是小的RNA分子如18s電泳速度快，泳道中的EB可以使其首先達(dá)到飽和，當(dāng)大的RNA分子如28s移動(dòng)過來的時(shí)候，EB已經(jīng)不能使其飽和了，也就是說有一部分28s是沒有熒光染料嵌合的，所以會出現(xiàn)各種18s亮度超過28s的情況。當(dāng)然，我覺得這種說法有點(diǎn)牽強(qiáng)，但是也不失為一種更直觀的解釋。當(dāng)然有些物種的有些組織的RNA跑出來確實(shí)是18s比28s亮的，這個(gè)我的理解是，這是物種以及組織的特異性. 關(guān)于18s和28s他們是一種客觀存在，不會因?yàn)樗鼈兊牧炼炔町惗兂蓪Ψ剑?8s再淡它也是28s，18s再亮它還是18s，這是不會發(fā)生改變的。有一句話說的好，再厲害的老鼠也變不成貓，呵呵，有點(diǎn)有點(diǎn)牽強(qiáng)附會了。 |
6樓2012-02-04 10:26:13
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