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斯多格格銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
rna條帶問題
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| 為什么提取的真菌RNA跑膠后,28s的亮度和寬度是18s的2倍呢(提取的比較好的情況下)?我在實驗室問了好多師兄師姐,解答都不怎么理想,還請各位蟲友幫忙解答下,謝謝啦! |
【分子生物】EPI帖 |

銅蟲 (小有名氣)

金蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
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這個應(yīng)該是這樣的,rRNA分子量大,代謝也不活躍,原核生物中主要有5s,16s和23s rRNA,真核生物中主要有5s,5.8s,18s和28s。 一般來說,28s的分子量大約為4.7k,18s的分子量大約為1.9k,而在細胞內(nèi)28s和18s的分子數(shù)是相同的,因為它們來源于同一個轉(zhuǎn)錄本,所以,摩爾數(shù)相同,質(zhì)量的比值就等于分子量的比值,這也是很多人用28s:18s是否為2:1來判斷提取的RNA質(zhì)量高低的理論依據(jù)。 當然理論必竟是理論,實際操作中會因為上樣量、電泳條件和物種之間的差異而出現(xiàn),28s:18s不等于2:1的情況,甚至?xí)霈F(xiàn)18s亮度大于28s的情況。這樣我們就要具體問題具體分析了。最好是用分光光度計測一下ratio值,水洗脫的話,在1.8-2.0之間的話就不錯,如果用試劑盒里面的Elution Buffer可能會高于2.0。 希望能幫到你。 |
銅蟲 (小有名氣)

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