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zhjzhou木蟲 (著名寫手)
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[求助]
基因克隆中酶切連接問(wèn)題
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| 各位大俠好，我克隆一個(gè)2000bp左右的基因，一開始設(shè)計(jì)的引物沒有加酶切位點(diǎn)，PCR產(chǎn)物直接連接到T-vector中，已經(jīng)測(cè)序和我的目的基因完全吻合。于是又重新設(shè)計(jì)加上酶切位點(diǎn)的引物，從質(zhì)粒上PCR，這樣PCR產(chǎn)物純化后可以直接連接到我要克隆的載體中，不需要酶切吧。我是這樣做的，現(xiàn)在遇到問(wèn)題了，我連接的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化老是長(zhǎng)不出來(lái)。請(qǐng)各位指點(diǎn)下，我PCR產(chǎn)物和載體都需要酶切，再進(jìn)行連接嗎？我以前PCR產(chǎn)物沒有酶切直接連接都可以的，現(xiàn)在不知道是怎么回事情了 |
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