 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 5/1 | 返回列表 |
| 查看: 7810 | 回復(fù): 54 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
構(gòu)建pBI121表達(dá)載體，目的基因與載體連接不上 已有1人參與
|
||
|
連續(xù)做了兩個(gè)多月的表達(dá)載體構(gòu)建了，始終不成功，希望各位大俠給與指點(diǎn)，具體情況如下： 載體為pBI121,目的基因700bp左右（兩端分別加有BamHI 和SacI酶切位點(diǎn)，連接在pmd18-simple上），用這兩個(gè)酶分別對(duì)pBI121和目的基因進(jìn)行雙酶切（先是BamHI 30度 4h,沉淀回收后SacI 37度 4h），電泳檢測(cè)（酶切完全）并回收，回收后電泳檢測(cè)條帶清晰可見，且大小也是對(duì)的。將回收的載體片段與目的基因用連接酶連接（用過寶生物的T4連接酶，現(xiàn)改為NEB的），轉(zhuǎn)化、涂板，來來回回做了不知道多少遍了，現(xiàn)在是在是不知道該怎么辦了，哪位做過、遇到過這些問題的大俠幫幫吧，謝謝啦！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有213人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
41樓2012-04-24 15:00:13
panda73
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 80 (初中生)
- 金幣: 1201.3
- 散金: 44
- 紅花: 2
- 帖子: 191
- 在線: 42.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 985964
- 注冊(cè): 2010-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-02-21 08:31:02
小丹木木(金幣+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-02-21 08:31:02
|
你克隆不成功的現(xiàn)象是什么？ 如果是無克�。耗强赡苁悄愕母惺軕B(tài)不好用，可以訂購新的 如果是無陽性克隆：我建議你做一個(gè)空載體的自連對(duì)照（即設(shè)計(jì)一個(gè)用水代替700bp片段的平行對(duì)照），如果自連對(duì)照也長(zhǎng)很多克隆，表明你的載體處理有問題。如果自連和目的對(duì)照都無克隆，可能是感受態(tài)有問題或PCR產(chǎn)物的酶切有問題。 關(guān)于分子克隆中的酶切設(shè)計(jì)，我覺得一個(gè)在線軟件很好用，能夠精確計(jì)算雙酶切時(shí)所需的酶的精確用量（再也不用猜測(cè)酶量用得夠不夠了）還能推薦雙酶切的最優(yōu)buffer，使用很方便，而且現(xiàn)在還可以免費(fèi)使用，用戶名和密碼都是test，你可以試一試，相信節(jié)省你做克隆的時(shí)間 |
2樓2012-02-20 22:55:32
panda73
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 80 (初中生)
- 金幣: 1201.3
- 散金: 44
- 紅花: 2
- 帖子: 191
- 在線: 42.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 985964
- 注冊(cè): 2010-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★
西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)熱心蟲蟲 2012-02-22 18:41:00
cxnde007: 金幣+1, ★有幫助 2012-04-26 09:27:14
西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)熱心蟲蟲 2012-02-22 18:41:00
cxnde007: 金幣+1, ★有幫助 2012-04-26 09:27:14
|
雙酶切的在線軟件，用戶名和密碼都是test http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php |
3樓2012-02-20 22:56:12
4樓2012-02-21 08:58:00
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學(xué)工程085602 305分求調(diào)劑 +18 | RichLi_ 2026-03-25 | 18/900 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿：西北大學(xué)，英一數(shù)一408-284分求調(diào)劑 +4 | 12.27 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理 材料求調(diào)劑 +5 | 李李不服輸 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+10
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑 +4 | IceGuo 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +7 | 宋明欣 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿9，初試成績(jī)：338，四六級(jí)已過，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑！ +4 | Zuhui0306 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +7 | hanamiko 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 希望上岸阿小楊 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 零八# 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | Sanmu-124 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿國(guó)科過程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求老師收我 +3 | zzh16938784 2026-03-23 | 3/150 |
|