 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 7782 | 回復: 54 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
構建pBI121表達載體，目的基因與載體連接不上 已有1人參與
|
|||
|
連續(xù)做了兩個多月的表達載體構建了，始終不成功，希望各位大俠給與指點，具體情況如下： 載體為pBI121,目的基因700bp左右（兩端分別加有BamHI 和SacI酶切位點，連接在pmd18-simple上），用這兩個酶分別對pBI121和目的基因進行雙酶切（先是BamHI 30度 4h,沉淀回收后SacI 37度 4h），電泳檢測（酶切完全）并回收，回收后電泳檢測條帶清晰可見，且大小也是對的。將回收的載體片段與目的基因用連接酶連接（用過寶生物的T4連接酶，現(xiàn)改為NEB的），轉化、涂板，來來回回做了不知道多少遍了，現(xiàn)在是在是不知道該怎么辦了，哪位做過、遇到過這些問題的大俠幫幫吧，謝謝啦！ |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 雜項 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有100人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 構建植物表達載體pBI121帶著GUS有木有影響啊
已經(jīng)有9人回復
- 目的片段與表達載體的連接
已經(jīng)有23人回復
- 已經(jīng)帶his標簽目的蛋白基因如何設計引物啊（目的基因已經(jīng)接在pET-22b的載體上了）
已經(jīng)有8人回復
- 關于SiRNA表達載體構建的問題
已經(jīng)有9人回復
- 目的基因連接pGEX-6p-1進行轉化的問題
已經(jīng)有14人回復
- 表達載體的構建
已經(jīng)有17人回復
- 表達載體構建的相關問題
已經(jīng)有15人回復
- 已知全長基因怎樣克隆并構建表達載體
已經(jīng)有8人回復
- 雙酶切連接表達載體，兩個月都沒做出來，問題到底出在哪里呢~？求指點
已經(jīng)有52人回復
- 【求助/交流】目的基因與pPIC9K連接的問題！
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】T-DNA全長約10000bp能否轉入植物基因組。
已經(jīng)有22人回復
- 【求助/交流】質粒跟目的基因連接不上怎么辦
已經(jīng)有17人回復
- 【求助/交流】目的基因連接表達載體后涂板不長菌
已經(jīng)有11人回復
- 【求助/交流】菌落PCR問題
已經(jīng)有23人回復
- 【求助/交流】表達載體構建不成功的原因
已經(jīng)有27人回復
- 【求助/交流】連接表達載體PET-28A失敗原因
已經(jīng)有23人回復
- 【求助/交流】釀酒酵母真核表達載體構建和連接的問題
已經(jīng)有6人回復
4樓2012-02-21 08:58:00
panda73
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 3
- 應助: 80 (初中生)
- 金幣: 1201.3
- 散金: 44
- 紅花: 2
- 帖子: 191
- 在線: 42.5小時
- 蟲號: 985964
- 注冊: 2010-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+1): 鼓勵應助 2012-02-21 08:31:02
小丹木木(金幣+1): 鼓勵應助 2012-02-21 08:31:02
|
你克隆不成功的現(xiàn)象是什么？ 如果是無克隆：那可能是你的感受態(tài)不好用，可以訂購新的 如果是無陽性克隆：我建議你做一個空載體的自連對照（即設計一個用水代替700bp片段的平行對照），如果自連對照也長很多克隆，表明你的載體處理有問題。如果自連和目的對照都無克隆，可能是感受態(tài)有問題或PCR產(chǎn)物的酶切有問題。 關于分子克隆中的酶切設計，我覺得一個在線軟件很好用，能夠精確計算雙酶切時所需的酶的精確用量（再也不用猜測酶量用得夠不夠了）還能推薦雙酶切的最優(yōu)buffer，使用很方便，而且現(xiàn)在還可以免費使用，用戶名和密碼都是test，你可以試一試，相信節(jié)省你做克隆的時間 |
2樓2012-02-20 22:55:32
panda73
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 3
- 應助: 80 (初中生)
- 金幣: 1201.3
- 散金: 44
- 紅花: 2
- 帖子: 191
- 在線: 42.5小時
- 蟲號: 985964
- 注冊: 2010-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
【答案】應助回帖
★
西瓜(金幣+1): 鼓勵熱心蟲蟲 2012-02-22 18:41:00
cxnde007: 金幣+1, ★有幫助 2012-04-26 09:27:14
西瓜(金幣+1): 鼓勵熱心蟲蟲 2012-02-22 18:41:00
cxnde007: 金幣+1, ★有幫助 2012-04-26 09:27:14
|
雙酶切的在線軟件，用戶名和密碼都是test http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php |
3樓2012-02-20 22:56:12
whb21
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 1
- 應助: 105 (高中生)
- 金幣: 9711.3
- 散金: 625
- 紅花: 7
- 帖子: 2994
- 在線: 172.4小時
- 蟲號: 928584
- 注冊: 2009-12-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
5樓2012-02-21 09:40:59
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300化學319求調劑 +6 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學336分求調劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調劑 +8 | 大可digkids 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研求調劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 302求調劑 +9 | 負心者當誅 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 293求調劑 +6 | 世界首富 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +6 | 孔志浩 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學材料專碩339分求調劑 +3 | 木子momo青爭 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 326求調劑 +4 | 諾貝爾化學獎覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300化學學碩求調劑 +6 | 太想進步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 求調劑 +13 | enenenhui 2026-03-13 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0856求調劑 +3 | 劉夢微 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 281求調劑 +9 | Koxui 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +5 | 一定有學上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 310求調劑 +3 | 【上上簽】 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | 程雨杭 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 270求調劑 085600材料與化工專碩 +3 | YXCT 2026-03-11 | 3/150 |
|