 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1155 | 回復(fù): 4 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
倔強(qiáng)的投手新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
Western若干問題
|
||
|
我剛開始做Western，很多東西還不是很了解，目前內(nèi)參還沒有做出來。有一些問題想請教大家： 1 我的目的蛋白在40kD左右，12%的膠，電泳條件是：濃縮膠60V，分離膠100V。轉(zhuǎn)膜的時候是恒壓60V，膠上的Marker基本都轉(zhuǎn)過去了。不知道這樣的條件是否合適，有人說300mA轉(zhuǎn)30-40分鐘就差不多了。我的膠是0.75mm的，最佳的轉(zhuǎn)膜條件應(yīng)該是多少��？ 2 我的上樣量大概25微克左右，剛開始做的時候，是不是應(yīng)該多點(diǎn)點(diǎn)樣��？ 3 一抗孵育的時候，因為實驗室沒有反轉(zhuǎn)的一起，所有我就直接平放在4度冰箱里的，這樣會有影響嗎？ 4 我現(xiàn)在做的目的蛋白，市面上沒有針對我所做的物種的特異性抗體，這樣是不是就要訂做抗體？訂做抗體是不是需要該蛋白的編碼序列，只有部分序列可以嘛？訂做一個抗體大概要多少錢��？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有253人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
天津商業(yè)大學(xué) 生物與醫(yī)藥課題組招生
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- western blot中蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- western抗體問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- western樣品處理問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 問題請教-western blotting
已經(jīng)有14人回復(fù)
- western blot時marker問題求助
已經(jīng)有18人回復(fù)
- western和PCR選擇問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助Western-bot轉(zhuǎn)膜問題
已經(jīng)有25人回復(fù)
- Western blot中出現(xiàn)的問題-求高手指點(diǎn)
已經(jīng)有17人回復(fù)
- Western Blot電泳蛋白質(zhì)外漏問題求助
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】western 曝光問題
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助】關(guān)于神經(jīng)元的western所遇到的問題
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】western 遇到問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)western-blot的一些問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- Western Blot 磷酸化蛋白測定問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- western Blotting 的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
sjn0301
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 211.9
- 帖子: 15
- 在線: 9.1小時
- 蟲號: 1628949
- 注冊: 2012-02-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
倔強(qiáng)的投手(金幣+2): ★★★很有幫助 2012-03-13 09:28:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
倔強(qiáng)的投手(金幣+2): ★★★很有幫助 2012-03-13 09:28:11
|
1.因為沒有看到你的結(jié)果，所以不確定是否需要改變條件，我們實驗室做western也用0.75mm的膠，轉(zhuǎn)膜條件是100V 1h，電流大概在每個槽子200-240mA，這和轉(zhuǎn)膜buffer的濃度有關(guān)。 2.上樣量根據(jù)你的結(jié)果而定吧，信號強(qiáng)弱和一抗，二抗?jié)舛纫灿嘘P(guān)系 3.最好不要這樣，個人平放的孵育效果和搖床差很多。當(dāng)然如果你一抗足夠好用可能也能得出不錯的結(jié)果。 4.很多抗體都是根據(jù)目標(biāo)蛋白某一段序列設(shè)計的，當(dāng)然為了提高抗體特異性，當(dāng)然能提供的越完整越好。 |
3樓2012-03-04 20:16:29
倔強(qiáng)的投手
新蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 953.9
- 散金: 50
- 紅花: 1
- 帖子: 185
- 在線: 39.7小時
- 蟲號: 1210386
- 注冊: 2011-02-23
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
2樓2012-02-23 12:30:27
sjn0301
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 211.9
- 帖子: 15
- 在線: 9.1小時
- 蟲號: 1628949
- 注冊: 2012-02-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
4樓2012-03-04 20:17:32
zyw_821212
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 162.6
- 帖子: 17
- 在線: 9.3小時
- 蟲號: 617414
- 注冊: 2008-10-05
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
5樓2012-03-12 19:28:23
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學(xué) +4 | goldtt 2026-04-02 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | 勇敢的小吳 2026-04-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑，接受跨專業(yè)調(diào)劑！ +4 | 閑魚盧 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +11 | 《樹》 2026-03-29 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +16 | zchqwer 2026-04-01 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 085602化學(xué)工程268分蹲調(diào)劑 +8 | 月照花林。 2026-04-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +9 | A child 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 08工科，295，接受跨專業(yè)調(diào)劑 +6 | lmnlzy 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +8 | 三水sss 2026-04-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程 085701，267求調(diào)劑 +15 | minht 2026-03-29 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 0855機(jī)械初試280求調(diào)劑 +3 | kazenotori 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑 +5 | zjjkt 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑：一志愿：南京大學(xué) 專業(yè)：0705 總分320 ，本科985，四六級已過 +3 | lfy760306 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | 篤行致遠(yuǎn). 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +7 | 雙馬尾痞老板2 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 254材料與化工求調(diào)劑 +3 | 翰冬林楠 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 英一數(shù)一總分334求調(diào)劑 +4 | 陳陽坤 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 材料專業(yè)申博 +5 | 杜雨婷dyt 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋320化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)碩求調(diào)劑 +8 | 披星河 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)321分求調(diào)劑 +10 | 三dd. 2026-03-30 | 11/550 |
|