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酶切專家金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于EcoRI的部分酶切
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我準(zhǔn)備用EcoRI+XbaI在我的質(zhì)粒上克隆外源基因，但酶切驗(yàn)證時(shí)發(fā)現(xiàn)在質(zhì)粒上有兩個(gè)EcoRI位點(diǎn)，所以不得不進(jìn)行部分酶切。 我的計(jì)劃是：先用XbaI進(jìn)行完全酶切，然后加少量EcoRI，進(jìn)行部分酶切（希望出現(xiàn)只在一個(gè)EcoRI位點(diǎn)切開的條帶），然后回收在我希望的位點(diǎn)切開的那條帶，進(jìn)行克隆。 我已經(jīng)嘗試了一次，發(fā)現(xiàn)即使只酶切5分鐘，質(zhì)粒上的兩個(gè)EcoRI都全切開了。大家有相關(guān)經(jīng)驗(yàn)嗎？ |
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