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請(qǐng)問(wèn)農(nóng)桿菌EHA105有鏈霉素抗性嗎？ 已有3人參與
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| 如題。網(wǎng)上看了些資料說(shuō)是這個(gè)菌株只抗利福平，但身邊也有人說(shuō)抗鏈霉素的。馬上要做實(shí)驗(yàn)了，十分的不踏實(shí)呢.... |
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西瓜
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2樓2012-03-18 17:31:30
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本來(lái)就是要靠這個(gè)特性來(lái)判斷手頭上的菌種是不是這個(gè)菌株的.... 已經(jīng)看過(guò)前人的討論了，有的人說(shuō)有，有的人說(shuō)沒(méi)有，搞得我都暈了，然后才發(fā)這個(gè)貼的... 剛看到原作者對(duì)這個(gè)問(wèn)題的回復(fù)了： It is true that EHA105 should have only rif-resistance (on the chromosome). However, when I made the strain, I used pPH1JI as an eviction plasmid to do the double homologous recombination. pPH1JI encodes spec resistance. We have a version of the strain that has lost pPH1JI and is spec-sensitive. Sincerely, Stan 這么說(shuō)是只有利福平抗性了？ |
3樓2012-03-18 18:06:34
西瓜
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……這個(gè)回復(fù)就糾結(jié)了。 作者說(shuō)，本來(lái)呢，EHA105這東西，應(yīng)該是只有Rif抗性的（染色體編碼）。但是在做這菌株的時(shí)候使用了pPH1JI 這個(gè)驅(qū)逐質(zhì)粒，pPH1JI 本身編碼Spec抗性基因。所以：如果你的菌株不含pPH1JI 質(zhì)粒，那么它就只有Rif抗性；如果含pPH1JI 質(zhì)粒，那么就同時(shí)帶Rif抗性和Spec抗性。 你可以檢測(cè)下你的菌株含不含這個(gè)質(zhì)粒就知道了。 另外，作者最后說(shuō)，他們有確定不含pPH1JI質(zhì)粒（不帶Spec抗性）的EHA105，你也可以考慮問(wèn)他要這個(gè)。 |
4樓2012-03-18 18:24:01
5樓2012-03-18 23:23:20
西瓜
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6樓2012-03-19 09:08:28
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西瓜: 金幣+2, 鼓勵(lì)反饋！ 2012-03-20 15:43:37
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試驗(yàn)的結(jié)果出來(lái)了，也許已經(jīng)沒(méi)什么意義了，也發(fā)上來(lái)吧。 前兩天拿自己實(shí)驗(yàn)室的菌種和別的實(shí)驗(yàn)室的菌種做了一下試驗(yàn)，自己的菌種是一直加strep 50mg/L和rif養(yǎng)的，借來(lái)的菌種一直只加rif。各取4個(gè)單菌落劃到strep濃度梯度平板。培養(yǎng)約40h。 結(jié)果是，自己實(shí)驗(yàn)室的能耐75mg/L或者以上的strep 借來(lái)的只能耐受最高50mg/L的strep 看來(lái)我們這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室的菌株都帶pPH1JI質(zhì)粒。 現(xiàn)在不糾結(jié)這個(gè)問(wèn)題了，很感謝西瓜版熱心的回復(fù)呢  |
7樓2012-03-20 15:21:55
king-long
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8樓2015-01-25 23:56:19
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9樓2015-01-26 00:00:07
naringenin
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按照作者的論文，pPH1JI是慶大霉素抗性的，和strep抗性毫無(wú)關(guān)系，而論文中描述EHA105是來(lái)源于EHA101就只是去了EHA101的卡納抗性，但是沒(méi)有帶入其他的抗性，在構(gòu)建的過(guò)程中還專門(mén)去掉了四環(huán)素的抗性，按照他的論文 EHA105是不帶任何抗性標(biāo)簽的。我覺(jué)得這個(gè)作者肯定有個(gè)地方?jīng)]說(shuō)清楚。因?yàn)椴粠Э剐詷?biāo)簽的話，這么多代，Ti質(zhì)粒還能在嗎？ |
10樓2015-03-20 22:14:01
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