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肖穎2009鐵蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于病毒擴(kuò)增的問(wèn)題
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| 請(qǐng)問(wèn)病毒感染細(xì)胞之前為什么要稀釋?稀釋之后感染細(xì)胞跟不稀釋加少量病毒感染細(xì)胞之間有什么區(qū)別? |
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫手)
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你是用293細(xì)胞擴(kuò)增病毒嗎?沒(méi)有規(guī)定非要稀釋病毒吧,只需要按一定的比例MOI投入到細(xì)胞中就行了吧!加入病毒濃度太高才需要稀釋下。對(duì)于你的問(wèn)題估計(jì)是怕病毒滴度太高,吸取少量有誤差,零點(diǎn)幾微升的誤差就會(huì)可能有十的八次方的滴度差距,所以還是稀釋的用比較好! [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |

鐵蟲(chóng) (正式寫手)
送鮮花一朵 |
朋友,請(qǐng)問(wèn)怎么計(jì)算最佳MOI呢?我是用MDBK細(xì)胞擴(kuò)增的,VSV的具體低度不清楚,這是從我一個(gè)在華農(nóng)讀博的師兄那里拿的,他也是找人要的,不是自己做的,所以不清楚具體滴度,只跟我說(shuō)比較高,大概有10的7次方。但是路途有一個(gè)小時(shí)左右,裝毒的VSV在途中融化了,回去也沒(méi)有馬上擴(kuò)增。是先放到負(fù)140多度的深度冷藏冰箱里,然后做了個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)有拿出來(lái)一次再放回去的。我想毒力應(yīng)該下降了不少。我準(zhǔn)備用8ml的大細(xì)胞培養(yǎng)瓶擴(kuò)增VSV,準(zhǔn)備加100微升vsv原液,稀釋至1毫升,就是稀釋十倍,不知道是否合適,還請(qǐng)多多指教。。≈x謝! |
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫手)
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我們這用293擴(kuò)增病毒是按MOI=10來(lái)加的,開(kāi)始擴(kuò)增的時(shí)候可以用培養(yǎng)瓶來(lái)擴(kuò),這個(gè)是沒(méi)問(wèn)題的,純化后再大量擴(kuò)增的話就需要十層板了。病毒只要不過(guò)多的反復(fù)凍融就沒(méi)多大的問(wèn)題,對(duì)它的活性沒(méi)有很大的影響,我們這是存在-80冰箱里面。假如你是要摸索病毒對(duì)你的目的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染最佳MOI的話,我們這里是先弄一個(gè)GFP到病毒上,然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞做流式,找到最佳MOI 你是華中農(nóng)業(yè)的? |

鐵蟲(chóng) (正式寫手)
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