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肖穎2009鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于病毒擴(kuò)增的問題
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| 請問病毒感染細(xì)胞之前為什么要稀釋？稀釋之后感染細(xì)胞跟不稀釋加少量病毒感染細(xì)胞之間有什么區(qū)別？ |
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wtyyyyy1988
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
肖穎2009: 金幣+2, ★有幫助 2012-04-08 08:42:13
肖穎2009: 金幣+2, ★有幫助 2012-04-08 08:42:13
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我們這用293擴(kuò)增病毒是按MOI=10來加的，開始擴(kuò)增的時候可以用培養(yǎng)瓶來擴(kuò)，這個是沒問題的，純化后再大量擴(kuò)增的話就需要十層板了。病毒只要不過多的反復(fù)凍融就沒多大的問題，對它的活性沒有很大的影響，我們這是存在-80冰箱里面。假如你是要摸索病毒對你的目的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染最佳MOI的話，我們這里是先弄一個GFP到病毒上，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞做流式，找到最佳MOI 你是華中農(nóng)業(yè)的？ |
4樓2012-03-28 15:31:44
wtyyyyy1988
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhaohq1209: 金幣+3, 對滴對滴~我也認(rèn)為是為了減少誤差才需要事先稀釋的~我們做細(xì)菌也是這樣的~ 2012-03-27 07:07:43
肖穎2009: 金幣+8, ★★★很有幫助 2012-03-28 14:22:38
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhaohq1209: 金幣+3, 對滴對滴~我也認(rèn)為是為了減少誤差才需要事先稀釋的~我們做細(xì)菌也是這樣的~ 2012-03-27 07:07:43
肖穎2009: 金幣+8, ★★★很有幫助 2012-03-28 14:22:38
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你是用293細(xì)胞擴(kuò)增病毒嗎？沒有規(guī)定非要稀釋病毒吧，只需要按一定的比例MOI投入到細(xì)胞中就行了吧！加入病毒濃度太高才需要稀釋下。對于你的問題估計是怕病毒滴度太高，吸取少量有誤差，零點幾微升的誤差就會可能有十的八次方的滴度差距，所以還是稀釋的用比較好！ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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2樓2012-03-26 23:42:40
肖穎2009
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送鮮花一朵 |
朋友，請問怎么計算最佳MOI呢？我是用MDBK細(xì)胞擴(kuò)增的，VSV的具體低度不清楚，這是從我一個在華農(nóng)讀博的師兄那里拿的，他也是找人要的，不是自己做的，所以不清楚具體滴度，只跟我說比較高，大概有10的7次方。但是路途有一個小時左右，裝毒的VSV在途中融化了，回去也沒有馬上擴(kuò)增。是先放到負(fù)140多度的深度冷藏冰箱里，然后做了個預(yù)實驗有拿出來一次再放回去的。我想毒力應(yīng)該下降了不少。我準(zhǔn)備用8ml的大細(xì)胞培養(yǎng)瓶擴(kuò)增VSV，準(zhǔn)備加100微升vsv原液，稀釋至1毫升，就是稀釋十倍，不知道是否合適，還請多多指教！��！謝謝！ |
3樓2012-03-28 14:31:21
肖穎2009
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5樓2012-04-08 08:45:17
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