 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3338 | 回復: 9 | |||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | |||||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
zhoujiang09新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄加模板問題 已有4人參與
|
||||
| 請問各位同仁，我現(xiàn)在要做逆轉(zhuǎn)錄PCR，我做逆轉(zhuǎn)錄之前測得RNA的濃度是340ng/ul，我按照fermentas逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的要求要從中取1ugRNA做逆轉(zhuǎn)錄，我先拿1000/RNA的濃度=2.94，是不是我取2.94ulRNA的量就相當于1ng RNA啊？還有，我取2.94ulRNA的話，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明，是不是只要調(diào)整水的量使反應體系不變就可以了�。�Sample Text |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 | 分子實驗 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有221人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
湖北師范大學招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助！關于RT-PCR的問題！
已經(jīng)有20人回復
- 做RT-PCR的戰(zhàn)友們，內(nèi)標定量怎么做？
已經(jīng)有18人回復
- 病毒RNA提取后做RT-PCR
已經(jīng)有13人回復
- cDNA做普通PCR擴不出條帶來
已經(jīng)有13人回復
- 【求助/交流】RNA峰度不夠！
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】關于做熒光定量pcr的模板問題
已經(jīng)有12人回復
- 【求助/交流】RT-PCR不成功
已經(jīng)有25人回復
- 【求助/交流】RT-PCR
已經(jīng)有5人回復
zhoujiang09
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 142.8
- 帖子: 31
- 在線: 8.3小時
- 蟲號: 1733408
- 注冊: 2012-04-02
- 專業(yè): 原發(fā)性腎臟疾病
6樓2012-04-03 13:22:39
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
2樓2012-04-03 10:46:21
西瓜
榮譽版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞衰老
- 管轄: 分子生物
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, MolEPI+1, 西瓜斑斑很專業(yè)的說 2012-04-05 11:30:43
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, MolEPI+1, 西瓜斑斑很專業(yè)的說 2012-04-05 11:30:43
樓上說得不錯了。我補充下 “是不是只要調(diào)整水的量使反應體系不變就可以了啊？”這個的前提是RNA的體積不要超過反轉(zhuǎn)錄體系的1/10。因為提取RNA用的試劑里有很多可以抑制酶活性的成分，如果RNA體積過多，殘余的東東會抑制反轉(zhuǎn)錄的。試劑盒說明書上應該有提到這點，一般就是不超1/10。 萬一加1ug的2.94uL已經(jīng)超過了1/10體積怎么辦捏？沒關系，減少RNA用量就可以了。試劑盒上說的1ug應該是RNA用量的上限，告訴你不要用超過這個量的RNA，否則反轉(zhuǎn)錄酶活性有限會不能把全部RNA都反轉(zhuǎn)錄成cDNA，這樣定量就不準確了。并不是說少于這個量的RNA就不能做。你用500ng、100ng都是可以的，具體參照試劑盒上的說明，應該還有提到RNA用量的下限。 如果你是做定量，那么盡量所有樣品都使用同樣量的RNA來做反轉(zhuǎn)錄吧，這樣得到的cDNA的濃度就是一樣的了。結(jié)合你所有樣品的RNA濃度，然后在試劑盒說明的RNA用量上下限之間取一個合適的值，讓所有樣品使用的RNA體積都小于1/10，這樣就ok了。 |
3樓2012-04-03 12:26:10
zhoujiang09
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 142.8
- 帖子: 31
- 在線: 8.3小時
- 蟲號: 1733408
- 注冊: 2012-04-02
- 專業(yè): 原發(fā)性腎臟疾病
我上周做了這個點的預實驗，RNA濃度是340ng/ul，逆轉(zhuǎn)錄的時候我取了1ul，擴增出來的cDNA再PCR,產(chǎn)物還跑得不錯，沒有引物二聚體，也沒有非特異性擴增。我準備上熒光定量了。
西瓜4樓2012-04-03 13:05:04
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學308分調(diào)劑 +11 | 你好明天你好 2026-03-30 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 本2一志愿C9-333分，材料科學與工程，求調(diào)劑 +9 | 升升不降 2026-03-31 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 070300一志愿211，312分求調(diào)劑院校 +12 | 小黃鴨寶 2026-03-30 | 12/600 |
|
|
[考研] 273求調(diào)劑 +3 | 李芷新1 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學296求調(diào)劑 +8 | 湯圓包 2026-03-29 | 12/600 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+12
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 367求調(diào)劑 +7 | 芋泥啵�！� 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +7 | Trying] 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑 +15 | Micky11223 2026-03-25 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +16 | kikiki7 2026-03-30 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 085601一志愿中山大學深圳材料工程330求調(diào)劑 +5 | pipiver 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工調(diào)劑一志愿大連海事085600，349 +6 | 吃的不少 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +11 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +14 | junqihahaha 2026-03-26 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 085602 化工專碩 338分 求調(diào)劑 +12 | 路癡小琪 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 070300求調(diào)劑306分 +4 | 26要上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|