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制作感受態(tài)細(xì)胞沒(méi)有冰浴有影響嗎?
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| 用DH5α氯化鈣法制備感受態(tài)細(xì)胞,沒(méi)有在冰浴進(jìn)行有影響嗎?還有氯化鈣氯化鎂要處理多久?氯化鈣氯化鎂處理有什么作用。 |
【分子生物】EPI帖 |
金蟲(chóng) (正式寫手)
木蟲(chóng) (正式寫手)
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正如上面所說(shuō)的,沒(méi)有冰浴的還是扔掉重做吧。 至于冰浴作用是:為了讓細(xì)胞膜流動(dòng)性降低,利于DNA的結(jié)合,同時(shí)使細(xì)胞暫停生長(zhǎng),維持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的高活性。 氯化鈣冰浴處理半小時(shí)即可。作用:在CaCl2溶液中,細(xì)胞會(huì)發(fā)生膨脹,Ca2+會(huì)使細(xì)胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu),促使細(xì)胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開(kāi)來(lái),離開(kāi)所在區(qū)域,誘導(dǎo)細(xì)胞成為感受態(tài)細(xì)胞。 |
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