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dajiong金蟲 (正式寫手)
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[求助]
構(gòu)建克隆載體時(shí)出現(xiàn)的問題
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| 從藍(lán)白篩選過(guò)的平板上挑了三個(gè)陽(yáng)性單克隆，搖菌過(guò)夜，第二天分別取菌液用PCR鑒定，發(fā)現(xiàn)只有一個(gè)出來(lái)了目的片段（1000bp左右的）。還有一個(gè)有片段但是只有500bp，還有一個(gè)壓根沒有目的片段……膠什么的都沒問題，想知道是在哪一步出了問題。謝謝！ |
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dajiong
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9樓2012-05-24 21:36:55
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dajiong: 金幣+10, ★★★很有幫助 2012-05-24 21:40:12
| 我們實(shí)驗(yàn)室就一直在做這個(gè)，藍(lán)白篩選平板上不一定全部都是陽(yáng)性克隆，存在很多假陽(yáng)性，所以會(huì)出現(xiàn)有的有目的片段，有的有插入片段但不是目的片段，或者有的壓根就沒有片段插入，你這個(gè)情況很正常。我們的做法是先放在4℃冰箱數(shù)個(gè)小時(shí)，假陽(yáng)性就可以表現(xiàn)出來(lái)，但是也不能完全避免這種情況，進(jìn)一步菌落PCR還是會(huì)有沒有目的片段的現(xiàn)象。只要有一個(gè)克隆出來(lái)了就行，留一部分養(yǎng)著，另一部分拿去測(cè)序，就能確定克隆序列是否正確了。 |
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2樓2012-05-24 13:27:42
hyacinth326
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4樓2012-05-24 15:02:12
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