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347239684木蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE電泳
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| 最近一直在做SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)，可是每次跑出來(lái)的條帶都會(huì)有豎的條帶出現(xiàn)，細(xì)胞破碎之后10000rpm/min離心30min，取上清加上樣緩沖液開水煮沸10min，再離心20多分鐘還是會(huì)出現(xiàn)紋理現(xiàn)象，不知道是什么原因？ |
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2012-06-06 17:26:40, 1.83 M
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2樓2012-06-06 17:46:21
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7樓2012-06-06 21:47:16
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【答案】應(yīng)助回帖
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347239684: 金幣+5 2012-06-07 08:54:56
小丹木木: 金幣+3, 很熱心，很中肯的建議 2012-06-07 13:54:05
347239684: 金幣+3 2012-06-10 17:01:36
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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347239684: 金幣+3 2012-06-10 17:01:36
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看到你的圖片了 Marker 沒有問題說明膠沒有問題 說明是你樣品問題：包括上樣Loading Buffer，樣品處理等， 從3個(gè)方面入手： 1. 你下次試著將樣品加入Loading Buffer后，煮沸時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)兒 2.還有就是上樣量要控制低一些 3.5%的濃縮膠聚合時(shí)間久一點(diǎn)，至少30min |
8樓2012-06-06 22:38:40
jasonwyb123
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助，歡迎熱心的蟲蟲 2012-06-07 13:54:38
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助，歡迎熱心的蟲蟲 2012-06-07 13:54:38
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看樣子不是你膠的問題 那就是你樣品處理的事情了 我這邊做，一般啥12000轉(zhuǎn)離心，1min一般就沒有問題 還有煮沸以前我才煮三分鐘，后來(lái)升到5min左右，就是讓蛋白變性而已，沒必要太久，不過久一點(diǎn)應(yīng)該也不會(huì)出現(xiàn)你說的那種情況 最后一點(diǎn) 我覺得你該換loading buffer了 如果啥自己配制的，重新配制 以前我也出現(xiàn)過一個(gè)問題 最后就是buffer的原因 |
9樓2012-06-07 09:16:22
sunnyseu
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10樓2012-06-07 21:22:41
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