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347239684木蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE電泳
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| 最近一直在做SDS-PAGE電泳實驗，可是每次跑出來的條帶都會有豎的條帶出現(xiàn)，細(xì)胞破碎之后10000rpm/min離心30min，取上清加上樣緩沖液開水煮沸10min，再離心20多分鐘還是會出現(xiàn)紋理現(xiàn)象，不知道是什么原因？ |
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2012-06-06 17:26:40, 1.83 M
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看到你的圖片了 Marker 沒有問題說明膠沒有問題 說明是你樣品問題：包括上樣Loading Buffer，樣品處理等， 從3個方面入手： 1. 你下次試著將樣品加入Loading Buffer后，煮沸時間長一點兒 2.還有就是上樣量要控制低一些 3.5%的濃縮膠聚合時間久一點，至少30min |
8樓2012-06-06 22:38:40
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看樣子不是你膠的問題 那就是你樣品處理的事情了 我這邊做，一般啥12000轉(zhuǎn)離心，1min一般就沒有問題 還有煮沸以前我才煮三分鐘，后來升到5min左右，就是讓蛋白變性而已，沒必要太久，不過久一點應(yīng)該也不會出現(xiàn)你說的那種情況 最后一點 我覺得你該換loading buffer了 如果啥自己配制的，重新配制 以前我也出現(xiàn)過一個問題 最后就是buffer的原因 |
9樓2012-06-07 09:16:22
sunnyseu
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