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mc2840261新蟲 (初入文壇)
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[求助]
纖維素酶高產(chǎn)菌株篩選時(shí)的透明圈問題
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| 小弟在做纖維素酶高產(chǎn)菌株的誘變選育，采用羧甲基纖維素鈉剛果紅培養(yǎng)基，但是透明圈很不明顯，基本上就比菌落大個(gè)1mm……想求助下各位大俠，到底是什么原因，有沒有改進(jìn)的方法，能讓透明圈變的大點(diǎn)~ |
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mc2840261: 回帖置頂 2012-06-12 10:47:33
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這是我當(dāng)時(shí)用的培養(yǎng)基 羧甲基纖維素鈉（CMC）培養(yǎng)基（參考察氏培養(yǎng)基，用羧甲基纖維素鈉取代其中的蔗糖，通過觀察培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)情況以及水解圈的大小和清晰程度，并經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)后，最終確定羧甲基纖維素鈉添加量為0.8%，并在其中添加適量氯霉素以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)，其余配方不變；CMC不易溶于水，在配制該培養(yǎng)基時(shí)，加入CMC后，需在80℃的水浴鍋中加熱2h并不斷攪拌使CMC充分溶解。） CMC 0.8% ，NaNO3 0.3%， KCl 0.05%， K2HPO4 0.1%，F(xiàn)eSO4 0.001%， MgSO4•7H2O 0.05%， 瓊脂 2%，氯霉素 0.005%，pH 6.0 ,115℃滅菌15min 剛果紅實(shí)驗(yàn)步驟待所點(diǎn)菌種在CMC平板上長(zhǎng)出可見菌落后，往平板里加入適量1mg/ml的剛果紅溶液，染色1h后，棄去染色液，并同時(shí)用蒸餾水清洗，最后加入適量1mol/L的NaCl溶液，脫色1小時(shí)，觀察水解圈直徑與菌落直徑的大小。 附件中試我當(dāng)時(shí)做的圖片 |
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2012-06-08 09:40:36, 1.08 M
11樓2012-06-08 09:40:39
yhjcwangyw
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zhang8826857: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2012-06-07 23:01:44
zhang8826857: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2012-06-07 23:01:44
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哥們，俺研究生就做和你一樣的課題。 首先，在配置羧甲基纖維素培養(yǎng)基時(shí)，將羧甲基纖維素鈉加入到培養(yǎng)基中然后加熱至八十?dāng)z氏度，一直攪拌，直至羧甲基纖維素鈉溶解為止。 其次，千萬(wàn)別在培養(yǎng)基中加剛果紅，我也做過的，水解圈效果不明顯，剛果紅抑制微生物生長(zhǎng)。 應(yīng)該是在未加剛果紅的培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物，待微生物菌落長(zhǎng)大后，添加1mg/ml的剛果紅溶液浸泡半個(gè)小時(shí)后，用NaCl溶液浸泡后，用蒸餾水沖洗，透明全就出來了 祝福你  |
4樓2012-06-07 17:45:50
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10樓2012-06-08 09:32:53
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