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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[求助]
簡并引物 PCR擴(kuò)增疑問
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我設(shè)計(jì)了一對簡并引物，以cDNA第一鏈為模板進(jìn)行擴(kuò)增。當(dāng)退火溫度是45度時(shí)，擴(kuò)增出一條模糊不清的片段，大小將近1000bp，是目的片段，如圖1所示。為了使條帶清晰，改變退火溫度，設(shè)定梯度為40度、45度、50度、55度、60度，均未擴(kuò)增出目的條帶，如圖2所示。出現(xiàn)這種結(jié)果不知什么原因。請大家?guī)蛡�忙，感激不盡�。。� 圖1 退火溫度為45度 圖2 梯度退火溫度 |
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hexf
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2樓2012-06-12 20:48:04
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3樓2012-06-13 23:14:29
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5樓2017-02-25 15:28:50
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
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簡并引物不好擴(kuò)，要求你的cDNA質(zhì)量高才行，如果擴(kuò)的跑膠不亮，濃度不夠ta克隆也做不出來，更何況條帶時(shí)有時(shí)無，建議還是做race靠譜些。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2017-02-25 15:36:39
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