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yeqi1126新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果分析 已有1人參與
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| 第一次做，用的ddCT法做相對(duì)定量。cDNA我稀釋了25倍，每個(gè)樣品3個(gè)結(jié)果（2復(fù)孔）。結(jié)果是CT值都30以上 RQ min和RQmax之間相差巨大。這是什么原因呢 求解~謝了 |
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Explor
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 1554.8
- 散金: 88
- 紅花: 2
- 帖子: 775
- 在線: 168.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 8160133
- 注冊(cè): 2018-03-05
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2019-11-29 15:06:59
【答案】應(yīng)助回帖
| 實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增，在擴(kuò)增的指數(shù)期對(duì)起始模板進(jìn)行定量，在擴(kuò)增過(guò)程中，熒光信號(hào)隨著PCR產(chǎn)物的增加而增強(qiáng)。我們實(shí)驗(yàn)室使用的BIOGHSC Super Probe Kit PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DNA,測(cè)得的循環(huán)數(shù)在28左右，整個(gè)PCR過(guò)程有4個(gè)階段，基線期---指數(shù)增長(zhǎng)期---線性增長(zhǎng)期---平臺(tái)期，指數(shù)增長(zhǎng)期內(nèi)，PCR有高度重復(fù)性，一般的檢測(cè)指標(biāo)是看線性圖譜的擴(kuò)增曲線的起跳值（CT值）。 |
3樓2019-12-09 13:04:58
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