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注定飛翔銀蟲 (初入文壇)
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M-MLV反轉(zhuǎn)錄最大多長(zhǎng)片段
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| M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶一般能有效反轉(zhuǎn)錄多長(zhǎng)片段，我有個(gè)4K多的RNA片段能否一次反轉(zhuǎn)錄拿到全長(zhǎng)CDNA |
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bbwalkman
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小丹木木: 金幣+5, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-12 13:36:04
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| 應(yīng)該是沒有問題的，不知道你的酶是不是TaKaRa的，我用的M-mlv（RNase H-），可用于較長(zhǎng)的cDNA合成以及高比例的全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建。而且它的說(shuō)明書里面有舉例說(shuō)明，通過(guò)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物分別擴(kuò)增了1kb、3kb、5kb、8kb和10kb的目的DNA片段，另外它也對(duì)4.4kb的RNA進(jìn)行了RT-PCR。所以說(shuō)，你呢4kb多的RNA應(yīng)該是沒有問題的。 |
2樓2012-06-11 21:35:06
注定飛翔
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3樓2012-06-12 15:23:06
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注定飛翔: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-06-13 19:01:18
注定飛翔: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-06-13 19:01:18
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你說(shuō)呢這個(gè)我沒用過(guò)，不過(guò)應(yīng)該都是一樣的吧，你如果是雙鏈的話你得考慮解鏈，然后你的primer才能結(jié)合，這樣在溫度上是不是你就需要進(jìn)行修改了。另外，我用的這個(gè)酶好像溫度太高（70℃以上）會(huì)失活，所以你用的時(shí)候要注意primer和你的模板雜交的時(shí)候先不要加酶。。。不過(guò)還是看看你的說(shuō)明書呢。。。祝實(shí)驗(yàn)順利 |
4樓2012-06-12 18:01:09
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