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[交流]
熒光定量PCR實驗技術(shù)
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最近導(dǎo)師叫學(xué)一下熒光定量PCR技術(shù),自己看了一些文獻,知道了熒光定量PCR是通過DNA質(zhì)粒配成不同標(biāo)準(zhǔn)濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)求出標(biāo)準(zhǔn)曲線,由于循環(huán)數(shù)與閾值Ct值和起始模板數(shù)成反比,而求出DNA的數(shù)量。由于本人不是學(xué)分子生物學(xué)和微生物學(xué)的,有幾個問題想像做過熒光定量PCR的大俠交流一下: 1、熒光定量PCR的儀器是否只需要熒光定量PCR儀、電腦和專業(yè)的軟件? 2、熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)DNA濃度要怎么配制?所需的DNA質(zhì)粒是不是需要買? 3、熒光定量PCR的成本又多高?我做土壤的總DNA,想問一個樣的成本是多少? 4、有沒有專業(yè)的系統(tǒng)的介紹熒光定量PCR的書籍或是資料?還請各位大俠教我。 5、看了一些文獻,現(xiàn)在熒光定量PCR大多是用于研究病原菌,想問問目前是否可以用這一技術(shù)研究土壤中有益的微生物? |
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1、熒光定量PCR的儀器是否只需要熒光定量PCR儀、電腦和專業(yè)的軟件? 熒光pcr當(dāng)然是需要熒光pcr儀器的,一般價格在40萬左右。半酣電腦,軟件,引物設(shè)計軟件。 2、熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)DNA濃度要怎么配制?所需的DNA質(zhì)粒是不是需要買? 如果你能知道你所提取的基因是說少ng 就不用買了。 3、熒光定量PCR的成本又多高?我做土壤的總DNA,想問一個樣的成本是多少? 做一次熒光PCR成本大概是普通的3倍吧,順利的話。主要是熒光染料的價格。儀器損耗不做考慮。 4、有沒有專業(yè)的系統(tǒng)的介紹熒光定量PCR的書籍或是資料?還請各位大俠教我。 書肯定是有的。小木蟲就能找到不少,你輸入RTpcr 就有很多 5、看了一些文獻,現(xiàn)在熒光定量PCR大多是用于研究病原菌,想問問目前是否可以用這一技術(shù)研究土壤中有益的微生物? 可以的。熒光PCR和普通PCR差不多,就是能定量檢測擴增效率,底物濃度等。不過不利于PCR產(chǎn)物回收用于接下來的實驗。 |

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