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[交流]
PET-32a雙酶切無法回收 已有8人參與
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用SalI和NotI雙酶切和t載體連接的目的片段及pET-32a空載體，發(fā)現(xiàn)目的片段能一次性順利回收回來并且鑒定完全正確，但空載體酶切后不是沒有條帶（提的質(zhì)粒已經(jīng)鑒定，濃度和質(zhì)量絕對么有問題），要不有帶但經(jīng)回收后鑒定時就消失了�。。�！做了有四次了，只有一次有條帶但鑒定沒有了!剩下的都是回收時沒有條帶�。。�！ 個人分析： 1,酶沒有問題，因為目的條帶順利回收！ 2,膠，緩沖液及試劑盒沒有問題，因為目的條帶順利回收！ 3,沒有降解問題，因為有沒有酶切的載體做對照！且marker跑的很好！ 4,提的質(zhì)粒沒有問題吧？！鑒定過了，三條帶非常完整，且亮度足夠！ 5,酶切是在37度下進(jìn)行，試過過夜，5小時，4小時，3小時！體系也試過40ul20ul的等等都優(yōu)化了，結(jié)果都一樣！ 這個實(shí)驗以前做過，同樣的實(shí)驗，只不過最近在重復(fù)做，但就遇到這種情況了，遇到鬼了！ 希望各位能幫忙分析一下！不甚感激�。。。�！謝謝�。。。�！ |
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