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758836596銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
pMAL載體表達重組蛋白
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| 最近在做蛋白表達，載體選擇的是pMAL，目的片段是自己設(shè)計的一段300多bp的片段，質(zhì)粒構(gòu)建成功之后蛋白就是表達不出來，宿主菌試了TB1和BL21，誘導溫度試了37,30,16，IPTG也試了各種濃度，結(jié)果還是誘導不出來，請問有什么別的辦法��？謝謝各位了。 |
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Marado
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 蟲蟲最近很活躍哦，謝謝對分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置頂 2013-05-29 19:02:17
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-29 19:02:17
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表達不出來的原因很多的，宿主菌跟誘導條件是一方面，另一方面要考慮你擴增的目的片段是否完整？有無表達先例，這個可以參照一些文獻，還有你目標片段的稀有密碼子是否檢測過，如果連續(xù)出現(xiàn)稀有密碼子，可能會造成翻譯中斷，這也會造成蛋白表達的失敗，如果是這個情況就需要更換專門表達稀有密碼子過多的宿主細胞. 建議樓主多從表達載體和目的片段的結(jié)構(gòu)入手，祝樓主好運.  |
2樓2012-07-02 21:48:45
Marado
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7樓2012-07-03 13:43:54
頂 |
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小丹木木: 屏蔽內(nèi)容, 廣告屏蔽 2012-07-03 15:36:51
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4樓2012-07-03 11:49:58
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5樓2012-07-03 13:29:33
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8樓2012-07-03 17:24:48
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10樓2012-07-04 19:09:46
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