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758836596銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
pMAL載體表達(dá)重組蛋白
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| 最近在做蛋白表達(dá)，載體選擇的是pMAL，目的片段是自己設(shè)計(jì)的一段300多bp的片段，質(zhì)粒構(gòu)建成功之后蛋白就是表達(dá)不出來，宿主菌試了TB1和BL21，誘導(dǎo)溫度試了37,30,16，IPTG也試了各種濃度，結(jié)果還是誘導(dǎo)不出來，請(qǐng)問有什么別的辦法��？謝謝各位了。 |
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plumplumgxc
金蟲 (正式寫手)
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9樓2012-07-04 10:57:00
Marado
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 蟲蟲最近很活躍哦，謝謝對(duì)分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置頂 2013-05-29 19:02:17
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 蟲蟲最近很活躍哦，謝謝對(duì)分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置頂 2013-05-29 19:02:17
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表達(dá)不出來的原因很多的，宿主菌跟誘導(dǎo)條件是一方面，另一方面要考慮你擴(kuò)增的目的片段是否完整？有無表達(dá)先例，這個(gè)可以參照一些文獻(xiàn)，還有你目標(biāo)片段的稀有密碼子是否檢測(cè)過，如果連續(xù)出現(xiàn)稀有密碼子，可能會(huì)造成翻譯中斷，這也會(huì)造成蛋白表達(dá)的失敗，如果是這個(gè)情況就需要更換專門表達(dá)稀有密碼子過多的宿主細(xì)胞. 建議樓主多從表達(dá)載體和目的片段的結(jié)構(gòu)入手，祝樓主好運(yùn).  |
2樓2012-07-02 21:48:45
小丹木木: 屏蔽內(nèi)容, 廣告屏蔽 2012-07-03 15:36:51
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2012-07-03 11:49:58
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5樓2012-07-03 13:29:33
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