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梔子花1120新蟲 (初入文壇)
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[求助]
的PCR一直沒有P出來，不知道哪里出了問題，請(qǐng)各位幫忙指點(diǎn)一下，謝謝�。�1
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最近一段時(shí)間在做PCR,但一直都沒有P出來，剛開始的時(shí)候懷疑是不是模板有問題，就用別人的試劑，引物也是別人的，結(jié)果有P出來，說明DNA沒有問題，試劑有可能有問題，就在我嘗試想看看是哪個(gè)試劑出現(xiàn)問題的時(shí)候，結(jié)果發(fā)現(xiàn)試劑沒有問題，都P出來了，我是這么做的： 第1管：別人的10*Buffer,我的dNTP,我的引物，我的酶； 第2管：我的10*Buffer，別人的dNTP，我的引物，我的酶； 第3管：我的10*Buffer，我的dNTP，別人的引物，我的酶； 第4管：我的10*Buffer，我的dNTP，我的引物，別人的酶，就是這樣錯(cuò)開一個(gè)，DNA 都是和上面同一個(gè)，結(jié)果都P出來了，如果是這樣的話，試劑應(yīng)該沒有問題啊。 第二天我又繼續(xù)這樣做，全部都用我的試劑，我的引物，我的DNA，結(jié)果又沒有P出來，重復(fù)了很多次，我怕我操作有問題，配體系的時(shí)候，一起加最后分裝和一個(gè)一個(gè)加體系我都做了好幾遍，每次PCR管內(nèi)的液體都混勻了，重復(fù)了N多次，都沒有P出來，很郁悶。 因?yàn)闀r(shí)間很緊，又繼續(xù)做，重復(fù)了很多次之后，終于有一次有P出來，正當(dāng)我高興開始做割膠回收配PCR體系時(shí)，它又沒有P出來，我叫我實(shí)驗(yàn)室的給我配體系，同樣也還是沒有P出來，重復(fù)了很多次，依然沒有P出來，我懷疑是引物的問題，今天就用別人的引物，其他的試劑都是我的，結(jié)果一次性就P出來了，而用我自己的引物P了很多次，都沒有P出來，我真的不知道是哪里出了問題，請(qǐng)各位高人指點(diǎn)一下。如果是引物的問題，那我中間有一次怎么又會(huì)P出來呢 |
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KO奮斗
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2樓2012-07-10 21:51:38
梔子花1120
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