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distant616金蟲 (小有名氣)
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[求助]
Q_PCR結(jié)果，請(qǐng)高手指點(diǎn)一下
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首先，我想問一下，Q_PCR的結(jié)果是不是可以正常的跑電泳，應(yīng)該能夠出現(xiàn)目的條帶；第二，我的溶解曲線是單峰，擴(kuò)增曲線也還可以，但是為什么跑電泳，竟然什么也沒用呢。第三，NTC也有出現(xiàn)單峰，懷疑是不是被污染了，還有就是標(biāo)準(zhǔn)曲線做的還可以，所以判斷并不確定。 一下是擴(kuò)增曲線和溶解曲線以及跑電泳的結(jié)果，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌拢x謝。我這小碩在此感激不盡。 |
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2012-07-12 11:35:25, 121.5 K
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溶解曲線很好啊，都沒有雜峰。 那電泳你試過幾次了，都是同樣結(jié)果么？ 普通PCR，同樣電泳條件都有很清楚的條帶么？ |
3樓2012-07-12 15:21:03
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電泳出來這樣子的結(jié)果是正常的。 我看到標(biāo)準(zhǔn)曲線低濃度的Ct值可能有些偏差，說明引物的擴(kuò)增效率可能有點(diǎn)低。模板濃度較高時(shí)的結(jié)果可信（圖中前三個(gè)點(diǎn)），但模板濃度較低的時(shí)候可能有點(diǎn)問題。 即使引物擴(kuò)增效率較高，引物特異性較好，跑瓊脂糖電泳還是可能會(huì)出現(xiàn)這樣子的結(jié)果，具體原因我以前好像在網(wǎng)上看見過，但是想不起來了。 如果你需要產(chǎn)物，最好還是采用普通PCR。 |
4樓2012-07-13 17:28:13
distant616
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