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distant616金蟲 (小有名氣)
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Q_PCR結(jié)果，請高手指點一下
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首先，我想問一下，Q_PCR的結(jié)果是不是可以正常的跑電泳，應(yīng)該能夠出現(xiàn)目的條帶；第二，我的溶解曲線是單峰，擴增曲線也還可以，但是為什么跑電泳，竟然什么也沒用呢。第三，NTC也有出現(xiàn)單峰，懷疑是不是被污染了，還有就是標準曲線做的還可以，所以判斷并不確定。 一下是擴增曲線和溶解曲線以及跑電泳的結(jié)果，請大家?guī)兔Ψ治鲆幌拢x謝。我這小碩在此感激不盡。 |
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2012-07-12 11:35:25, 121.5 K
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distant616: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-07-15 09:29:58
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電泳出來這樣子的結(jié)果是正常的。 我看到標準曲線低濃度的Ct值可能有些偏差，說明引物的擴增效率可能有點低。模板濃度較高時的結(jié)果可信（圖中前三個點），但模板濃度較低的時候可能有點問題。 即使引物擴增效率較高，引物特異性較好，跑瓊脂糖電泳還是可能會出現(xiàn)這樣子的結(jié)果，具體原因我以前好像在網(wǎng)上看見過，但是想不起來了。 如果你需要產(chǎn)物，最好還是采用普通PCR。 |
4樓2012-07-13 17:28:13
bondy22
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溶解曲線很好啊，都沒有雜峰。 那電泳你試過幾次了，都是同樣結(jié)果么？ 普通PCR，同樣電泳條件都有很清楚的條帶么？ |
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3樓2012-07-12 15:21:03
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陽性對照P出來，而樣品P不出來，可能原因是：1. 樣品中目標基因濃度太低，超出檢測范圍；2. 引物針對的基因可能在你的樣品中不存在。 可以考慮： 1. 繼續(xù)優(yōu)化，如增加鎂離子、BSA牛血清蛋白，產(chǎn)物擴增時間是否夠？ 2.換引物。每對引物都有自己的擴增范圍，不是萬能的。 |
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8樓2012-07-16 10:57:37
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9樓2012-07-16 18:24:35
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那就是把樣品模板濃度增加。我以前試過把PCR產(chǎn)物放在高溫環(huán)境（50-60度）下一段時間（根據(jù)樣品體積來掌握）后在再回收。需要注意不要烘干了。 |
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10樓2012-07-17 14:58:55
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