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distant616金蟲 (小有名氣)
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Q_PCR結(jié)果，請(qǐng)高手指點(diǎn)一下
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首先，我想問(wèn)一下，Q_PCR的結(jié)果是不是可以正常的跑電泳，應(yīng)該能夠出現(xiàn)目的條帶；第二，我的溶解曲線是單峰，擴(kuò)增曲線也還可以，但是為什么跑電泳，竟然什么也沒(méi)用呢。第三，NTC也有出現(xiàn)單峰，懷疑是不是被污染了，還有就是標(biāo)準(zhǔn)曲線做的還可以，所以判斷并不確定。 一下是擴(kuò)增曲線和溶解曲線以及跑電泳的結(jié)果，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌拢x謝。我這小碩在此感激不盡。 |
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2012-07-12 11:35:25, 121.5 K
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yanqindeng
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
distant616: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-07-15 09:29:58
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電泳出來(lái)這樣子的結(jié)果是正常的。 我看到標(biāo)準(zhǔn)曲線低濃度的Ct值可能有些偏差，說(shuō)明引物的擴(kuò)增效率可能有點(diǎn)低。模板濃度較高時(shí)的結(jié)果可信（圖中前三個(gè)點(diǎn)），但模板濃度較低的時(shí)候可能有點(diǎn)問(wèn)題。 即使引物擴(kuò)增效率較高，引物特異性較好，跑瓊脂糖電泳還是可能會(huì)出現(xiàn)這樣子的結(jié)果，具體原因我以前好像在網(wǎng)上看見過(guò)，但是想不起來(lái)了。 如果你需要產(chǎn)物，最好還是采用普通PCR。 |
4樓2012-07-13 17:28:13
bondy22
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2樓2012-07-12 14:04:23
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【答案】應(yīng)助回帖
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溶解曲線很好啊，都沒(méi)有雜峰。 那電泳你試過(guò)幾次了，都是同樣結(jié)果么？ 普通PCR，同樣電泳條件都有很清楚的條帶么？ |
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3樓2012-07-12 15:21:03
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bestlike: 金幣+1, 鼓勵(lì)新蟲交流！ 2012-07-16 11:28:44
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陽(yáng)性對(duì)照P出來(lái)，而樣品P不出來(lái)，可能原因是：1. 樣品中目標(biāo)基因濃度太低，超出檢測(cè)范圍；2. 引物針對(duì)的基因可能在你的樣品中不存在。 可以考慮： 1. 繼續(xù)優(yōu)化，如增加鎂離子、BSA牛血清蛋白，產(chǎn)物擴(kuò)增時(shí)間是否夠？ 2.換引物。每對(duì)引物都有自己的擴(kuò)增范圍，不是萬(wàn)能的。 |
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8樓2012-07-16 10:57:37
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9樓2012-07-16 18:24:35
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那就是把樣品模板濃度增加。我以前試過(guò)把PCR產(chǎn)物放在高溫環(huán)境（50-60度）下一段時(shí)間（根據(jù)樣品體積來(lái)掌握）后在再回收。需要注意不要烘干了。 |
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10樓2012-07-17 14:58:55
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