 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4806 | 回復(fù): 15 | |||
yanshuai511銅蟲 (小有名氣)
|
[求助]
GPCR蛋白N端連flag不表達(dá)！急！
|
||
| FLAG 連在G 蛋白耦連的受體的N端，做了兩個月了還是沒有進(jìn)展。測序是正確的，也沒有移碼。可western就是檢測不到FLAG的表達(dá)。受體的ATG帶著和不帶著我都做了，也不表達(dá)。轉(zhuǎn)染的時間24h和48h我也做過了。載體也換過，還是不表達(dá)。我看有的文章說GPCR，有的是有糖基化，所以會影響融合蛋白表達(dá)的位置。有沒有做過給G蛋白耦連受體連flag的大神，幫忙分析一下。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有296人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 一些蛋白基礎(chǔ)技術(shù)資料
已經(jīng)有81人回復(fù)
- 蛋白純化標(biāo)簽有哪些?
已經(jīng)有6人回復(fù)
- pMAL載體表達(dá)重組蛋白
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 緊急求助:SDS-PAGE上樣一定要調(diào)蛋白含量嗎？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- Ebook__蛋白質(zhì)書籍（純化與鑒定、電泳、技術(shù)手冊、結(jié)構(gòu)預(yù)測與分子設(shè)計）四本
已經(jīng)有389人回復(fù)
- 關(guān)于質(zhì)譜測定蛋白質(zhì)分子量的圖譜分析
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 原核表達(dá)中目的蛋白不明確
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 蛋白突變后不表達(dá)了
已經(jīng)有8人回復(fù)
- pET-28a原核不能表達(dá)目的蛋白
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 目的蛋白序列連接pet15b測序結(jié)果正確為何不表達(dá)
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 蛋白表達(dá)不明確，但是連菌體蛋白都不見
已經(jīng)有9人回復(fù)
- Western Blot實驗的蛋白條帶都連在一起
已經(jīng)有37人回復(fù)
- 蛋白酶基因表達(dá)，用的Bacillus subtilis系統(tǒng)，但總是表達(dá)不出，求高人指點……
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 畢赤酵母怎么表達(dá)不出融合蛋白？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】蛋白誘導(dǎo)表達(dá)不出目標(biāo)條帶
已經(jīng)有41人回復(fù)
12樓2015-07-02 22:28:56
chenliang_0513
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 貴賓: 0.01
- 金幣: 8830.8
- 散金: 353
- 紅花: 3
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 3036
- 在線: 347.9小時
- 蟲號: 243880
- 注冊: 2006-04-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+4, 鼓勵發(fā)帖幫助解答問題。 2012-07-15 19:46:01
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+4, 鼓勵發(fā)帖幫助解答問題。 2012-07-15 19:46:01
|
既然測序是正確的，那就應(yīng)該ORF沒用問題。WB做不出來的原因很多的。先手我不知道你在哪兒表達(dá)的，難道是酵母？還怕出現(xiàn)糖基化……如果是酵母一般不需要用wb吧，考染就看的見的；大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)一般也不需要。估計你用的還是真核表達(dá)系統(tǒng)。 那么你先要注意自己的載體是不是可以在真核細(xì)胞中表達(dá)？（含真核的啟動子，終止序列等）以前用這個載體做過其他的基因表達(dá)沒有？就是最好有正對照 其次，你最好頂一個beta-actin或GAPDH的抗體，做內(nèi)參，煮的細(xì)胞就可以，如果能做出來，證明wb的操作沒有問題，如果做不出來很可能就是操作的問題 我不知道你的抗體是哪個公司的，推薦用sigma的那個M4的鼠源的單抗，有些公司的不好用，效價很低 如果還有問題，再聯(lián)系我吧，祝實驗順利！ |
2樓2012-07-15 16:20:07
yanshuai511
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 302.6
- 散金: 13
- 紅花: 4
- 帖子: 58
- 在線: 13小時
- 蟲號: 1165383
- 注冊: 2010-12-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2012-07-15 16:30:42
chenliang_0513
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 貴賓: 0.01
- 金幣: 8830.8
- 散金: 353
- 紅花: 3
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 3036
- 在線: 347.9小時
- 蟲號: 243880
- 注冊: 2006-04-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
4樓2012-07-15 16:36:28
yanshuai511
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 302.6
- 散金: 13
- 紅花: 4
- 帖子: 58
- 在線: 13小時
- 蟲號: 1165383
- 注冊: 2010-12-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2012-07-15 16:46:55
yanshuai511
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 302.6
- 散金: 13
- 紅花: 4
- 帖子: 58
- 在線: 13小時
- 蟲號: 1165383
- 注冊: 2010-12-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2012-07-20 11:08:17
royxueli
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 217
- 散金: 14
- 帖子: 21
- 在線: 20.4小時
- 蟲號: 884452
- 注冊: 2009-10-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
7樓2012-10-05 17:17:41
yanshuai511
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 302.6
- 散金: 13
- 紅花: 4
- 帖子: 58
- 在線: 13小時
- 蟲號: 1165383
- 注冊: 2010-12-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
8樓2012-10-07 12:28:19
liuyan3020
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 52.1
- 帖子: 14
- 在線: 26.4小時
- 蟲號: 1309193
- 注冊: 2011-05-29
- 專業(yè): 合成藥物化學(xué)
9樓2013-06-02 19:53:02
10樓2013-10-08 15:35:42
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 yanshuai511 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +6 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +5 | NIFFFfff 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +5 | 匹克i 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑 +7 | vv迷 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分求調(diào)劑 +3 | 你好明天你好 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +7 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 286分人工智能專業(yè)請求調(diào)劑愿意跨考！ +4 | lemonzzn 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +11 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[基金申請]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +12 | 梁梁校校 2026-03-19 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 085601調(diào)劑 358分 +3 | zzzzggh 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 083200學(xué)碩321分一志愿暨南大學(xué)求調(diào)劑 +3 | innocenceF 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|
|
|
[考博] 26博士申請 +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|