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mayibuku木蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR引物設計求助
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各位版友,最近在做一個PCR的primer設計,模板大概500bp左右,GC含量47%,位于一個環(huán)形質(zhì)粒上面,這些都很正常。但是麻煩的地方在于,我的s primer 需要一個6bp酶切位點以及相應保護堿基之類的,長度大概是30左右,但是我的anti primer需要在C端加上三個蛋白,也就是9bp,然后還有6bp的酶切位點,這樣全部加起來長度達到了45bp,這樣兩個primer的長度相差很大,TM相差也很大,而且anti primer已經(jīng)超過了38bp,也就是延伸溫度可能會超過74度,這樣退火延伸溫度都不太好選擇 這個PCR產(chǎn)物我是準備用來做TA克隆的,因此保護堿基數(shù)目已經(jīng)設計得盡可能少了,但是還是很長,這種情況應該怎么優(yōu)化呢? |
木蟲 (正式寫手)
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木蟲 (正式寫手)
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