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夢飛zhu新蟲 (初入文壇)
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[求助]
熒光定量PCR ，條件優(yōu)化
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給位大俠，我想問一下： 1、熒光定量PCR ，條件具體怎么優(yōu)化，我具體從引物濃度、退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。 是不是優(yōu)化一個條件就需要做一次熒光定量（比如對熒光定量PCR體系中的引物濃度進(jìn)行優(yōu)化，分別做50、300、600、900 nm、1、10、20、30 μm引物濃度的優(yōu)化組合），還是一次熒光定量就可以把所有的優(yōu)化條件都解決了，進(jìn)行比較啊。 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，一般用什么標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋濃度確定用分光光度計測定嗎？ 新手，求助。 |
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chenguestc
木蟲 (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2012-07-30 13:44:47
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2012-07-30 13:44:47
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是的，qPCR不像普通PCR那樣可以做梯度，調(diào)整一個條件就需要做一次。 我們常用到的qPCR supplies 及用量（1個反應(yīng)，20ul體系）如下，樓主可根據(jù)這個用量適量調(diào)整： TBSYBRmix 10 ul PrimerF (10uM) 0.6 ul PrimerFR (10uM) 0.6 ul cDNA (20ng/ul) 2 ul Reference dye 0.4 ul ddH2O 6.4 ul |
6樓2012-07-30 12:31:18
zcy1214
木蟲 (著名寫手)
普通青年
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2樓2012-07-28 11:28:57
vickie20
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3樓2012-07-29 10:50:30
4樓2012-07-29 19:56:50
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