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載體構(gòu)建問題
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最近在構(gòu)建一個載體。載體用的是PET-28a，目的片段680bp。酶切位點是BamHI和HindIIII。連接了兩次都長了20個左右的菌落，其中一次做了陰性對照和感受態(tài)對照，結(jié)果只有轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物的長了，但PCR和酶切鑒定都沒有，拿去測序中間連了未知的東西。做了兩周了，好急啊，請高手指點！ 另外也同時連了PET-TrX、GST、DsbA、His，結(jié)果是一樣的，每次轉(zhuǎn)化后都有菌落長出來，但是就是鑒定不出來我自己的目的片段，好郁悶 |
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| 你的目的片段是PCR擴增出來的嗎？有沒有拖帶現(xiàn)象，帶弱不弱？我覺得很有可能是你產(chǎn)物沒有回收到，也就是你沒有把你的目的片段得到，所以你后來做的酶切、連接的都不是你的目的帶，導(dǎo)致酶切質(zhì)粒鑒定時切不出你的目的條帶。如果送測序的話，估計會測出比你目的基因多一些的堿基。順便問問，是不是酶切出的目的帶比你的680bp大些呢？僅供參考！ |
8樓2012-08-04 10:07:10
9樓2012-08-04 14:20:24
10樓2012-08-04 14:25:38
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