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載體構(gòu)建問題
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最近在構(gòu)建一個載體。載體用的是PET-28a,目的片段680bp。酶切位點是BamHI和HindIIII。連接了兩次都長了20個左右的菌落,其中一次做了陰性對照和感受態(tài)對照,結(jié)果只有轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物的長了,但PCR和酶切鑒定都沒有,拿去測序中間連了未知的東西。做了兩周了,好急啊,請高手指點! 另外也同時連了PET-TrX、GST、DsbA、His,結(jié)果是一樣的,每次轉(zhuǎn)化后都有菌落長出來,但是就是鑒定不出來我自己的目的片段,好郁悶 |

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